黄芪为豆科植物蒙古黄芪(Astragalusmem-branaceus(Fisch.) Bge.var mongholicus(Bge.) Hsiao）或膜荚黄芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge.）的干燥根。黄芪为中医补气要药，具有补气固表、敛疮生肌、利尿托毒等功能。现代药理学研究表明，黄芪具有增强机体免疫、降血糖、强心、利尿、降压、抗衰老及抗疲劳等多种药理学活性。黄芪中的主要有效成分为黄芪多糖(astragalus polysaccharides)、黄芪皂苷(astragalus saponins)和黄芪异黄酮(isoflavones)，目前主要采用黄芪皂苷中的黄芪甲苷(AstragalosideⅣ)作为评价黄芪药材质量优劣的标准。2010年版《中华人民共和国药典》记载黄芪甲苷定量分析方法为高效液相色谱法(HPLC-ELSD)，但高效液相色谱法(HPLC-ELSD)尚存在操作繁琐、仪器昂贵等不足。为建立一种快速、灵敏、准确、经济的检测黄芪甲苷的免疫学分析方法，本论文制备了AST-BSA、AST-KLH两种不同蛋白载体的黄芪甲苷人工抗原，分别考察了AST-BSA、AST-KLH的免疫原性。通过将抗黄芪甲苷单克隆抗体结合到环氧氯丙烷活化的琼脂糖凝胶6B上制备了亲和介质，将所制备亲和介质装配成亲和层析柱，并通过测定亲和层析柱对黄芪甲苷标准品溶液及黄芪制品中黄芪甲苷的提取分离效果检测了柱效，为建立黄芪甲苷的免疫分析技术提供了研究基础。主要研究内容和结论如下:　　1.AST-BSA、AST-KLH的制备与鉴定。采用高碘酸钠法，分别以牛血清白蛋白(BSA)、匙孔血蓝蛋白(KLH)为载体，合成两种不同的黄芪甲苷人工抗原AST-BSA、AST-KLH。采用紫外扫描法验证偶联反应是否发生。采用紫外吸收法测定所合成人工抗原的偶联比，并以质谱法测定偶联比以验证紫外吸收法测定结果的准确性。考察了合成条件中投料比、反应时间、反应pH对合成人工抗原的偶联比的影响并优化了合成条件。结果表明，通过高碘酸钠法能够成功将黄芪甲苷偶联到载体蛋白上，通过条件优化，确定最佳反应时间为4h，最适反应pH为9.0，最佳投料比为略大于500∶1。采用优化后的条件成功合成了AST-BSA、AST-KLH，且偶联比均在文献报道最适范围内。　　2.AST-BSA、AST-KLH免疫原性的检测。以所制备的人工抗原免疫小鼠，并检测经免疫后小鼠血清抗体的效价和特异性，评价人工抗原的免疫原性。采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价，以间接竞争ELISA法检测小鼠血清抗体对黄芪甲苷的特异性。采用倍比稀释法确定辣根酶标记羊抗鼠抗体最佳工作浓度，以棋盘方阵法确定包被抗原及血清抗体的最佳工作浓度。结果表明，确定了酶标抗体最佳工作浓度为稀释6000倍，包被抗原最佳工作浓度为4μg/mL，抗体血清最佳工作浓度为稀释32000倍，建立了适用于本实验的间的ELISA法和间接竞争ELISA法。小鼠抗血清检测结果表明，以AST-BSA免疫小鼠所得抗体血清效价略高于以AST-KLH免疫小鼠所得抗体血清，但以AST-KLH免疫小鼠所得抗体血清结合黄芪甲苷的特异性高于以AST-BSA免疫小鼠所得抗体血清。　　3.黄芪甲苷免疫层析分离柱的制备。采用环氧氯丙烷活化的琼脂糖凝胶6B(EAS6B)作为基质，将抗黄芪甲苷单克隆抗体偶联到基质上制备了亲和介质，并组装成亲和层析柱。采用红外分光光度法检测偶联反应是否发生。采用考察偶联过程中反应温度及反应pH对每克基质所偶联单克隆抗体量的影响，优化了亲和介质的制备方法。采用测定所装配亲和柱对不同浓度黄芪甲苷标准品溶液中的黄芪甲苷的吸附率以检测亲和层析柱的柱效及最大载样量。通过红外扫描光谱可知，通过偶联反应能将单克隆抗体成功偶联到基质上。合成方法优化实验结果表明，反应温度为45℃，反应pH为10.0时每克基质偶联的单克隆抗体的量最大。经测定每1mL亲和介质吸附黄芪甲苷的最大载样量约为0.23 mg。　　4.黄芪制品中黄芪甲苷的亲和层析提取。采用已制备的亲和层析柱分离两种黄芪制品中的黄芪甲苷，以验证亲和层析柱的实用性。采用与已有文献报道的提取方法对比，检测亲和层析柱对黄芪制品中黄芪甲苷的提取效果。结果证明，制备的黄芪甲苷亲和层析分离柱对两种黄芪制品中黄芪甲苷均有较好的分离提取效果，提取率分别为77.0％、97.8％，其中对液体制品中黄芪甲苷的提取效果更好。