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目的:本实验以国家自然科学基金资助项目(编号:81072838)为依托进行设计。在中医学“情志学说”理论基础上,结合现代医学“心理应激”理论,以体外培养的人子宫肌瘤平滑肌细胞(简称ULM细胞)为研究对象,探讨“肝郁-心理应激”通过肾上腺素能受体(Adrenergic Receptor,AR)信号转导途径,上调VEGF、FGF表达的作用机制,为临床从“肝郁-心理应激”角度防治子宫肌瘤(Uterine leiomyomas,ULM)提供新的思路及方法,并为中医学“情志学说”提供新的理论依据。 方法:采用胶原酶消化法对UL M细胞进行原代培养,经H E及免疫组化染色法进行细胞学鉴定。将培养的ULM细胞分为4组:Α.空白组;B.去甲肾上腺素(Norepinephrine, NE)组;C.肾上腺素(Epinephrine,E)组;D.异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)组。除Α组外,B组于培养液中添加NE:0.1μmol/l、1μmol/l、10μmol/l;C组于培养液中添加E:0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmo l/l;D组于培养液中添加ISO:0.1μmo l/l、1μmo l/l、10μmol/l。应用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA法)分别于以下四个时间点:3h、6h、12h、24h检测细胞培养液中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)、成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)的蛋白表达。 结果: 1.成功培养了原代ULM细胞,并经HE染色及免疫细胞化学鉴定证实。 2.各组ULM细胞培养液中VEGF蛋白表达的比较 ①N E对U LM细胞VE GF蛋白表达的影响 不同剂量组和空白组多重分析,各剂量组VEGF蛋白表达平均测量值均高于空白组(P=0.000),1剂量组VEGF蛋白表达平均测量值最高,1剂量组和10剂量组VEGF蛋白表达平均测量值一致,差别无统计学意义(P=0.074)。 不同测量时间点多重分析,各测量时间点的VEGF蛋白表达平均测量值不同(P=0.000),6小时的VEGF蛋白表达平均测量值最高、随后呈现下降趋势。 ②E对U LM细胞V EGF表达量影响 不同剂量组和空白组多重分析,各剂量组VE GF蛋白表达平均测量值均高于空白组(P=0.000),10剂量组VEGF蛋白表达平均测量值最高。 不同测量时间点多重分析,各测量时间点的V EGF蛋白表达平均测量值不同(P=0.000),6小时的VEGF蛋白表达平均测量值最高、随后呈现下降趋势。 ③ISO对ULM细胞VEGF表达量影响 不同剂量组和空白组多重分析,1剂量组和10剂量组VEGF蛋白表达平均测量值低于空白组(P=0.000)。0.1剂量组VEGF蛋白表达平均测量值与空白组相比差别无统计学意义(P=0.167)。 不同测量时间点多重分析,VE GF蛋白表达平均测量值随测量时间的延长呈下降趋势,除12小时和24小时 VEGF蛋白表达平均测量值一致外(P=1.000),其他测量点VEGF蛋白表达平均测量值不同,差别均有统计学意义(P<0.05)。 3.各组ULM细胞培养液中FGF蛋白表达的比较 ①NE对ULM细胞FGF蛋白表达的影响 不同剂量组和空白组多重分析,1剂量组和10剂量组FGF蛋白表达平均测量值高于空白组(P=0.003,P=0.001)。其余各组间组FGF蛋白表达平均测量值差别无统计学意义(P>0.05)。 不同测量时间点多重分析,6小时和12小时的FGF蛋白表达平均测量值分别高于3小时FGF蛋白表达平均测量值(P=0.015,P=0.003),其余测量时间点的FGF蛋白表达平均测量值差异无统计学意义(P>0.05)。 ②E对U LM细胞F GF蛋白表达的影响 不同剂量组和空白组多重分析,1剂量组和10剂量组FGF蛋白表达平均测量值高于空白组(P=0.020,P=0.000),0.1剂量组 FGF蛋白表达平均测量值与空白组一致,差别无统计学意义(P=0.322)。 不同测量时间点多重分析,6小时和12小时的FGF蛋白表达平均测量值分别高于3小时的FGF蛋白表达平均测量值(P=0.000,P=0.001),其余测量时间点的FGF蛋白表达平均测量值差异无统计学意义(P>0.05)。 ③ISO对ULM细胞F GF蛋白表达的影响 不同剂量组和空白组多重分析,各剂量组FGF蛋白表达平均测量值均低于空白组FGF蛋白表达平均测量值(P=0.000)。 不同测量时间点多重分析,24小时的FGF蛋白表达平均测量值低于3小时和12小时的FGF蛋白表达平均测量值(P=0.005,P=0.042),其余测量时间点的FGF蛋白表达平均测量值差异无统计学意义(P>0.05)。 结论: 1.肾上腺素能受体激动剂NE、E可促进ULM细胞VEGF、FGF的表达。 2.肾上腺素能受体激动剂ISO可降低ULM细胞VEGF、FGF的表达。 3.因此,本课题组推测:肝郁-心理应激可能通过促进神经递质NE、E的表达,激活肾上腺素能受体信号转导途径,上调ULM细胞VEGF、FGF的表达,促进 ULM细胞增殖,而导致U LM形成。此结果为临床从肝郁-心理应激角度防治 UL M提供新的思路和方法,并为中医学“情志学说”提供新的理论依据。