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背景帕金森病(PD)是人类常见的神经退行性疾病之一,其主要病理特征是中脑黑质致密部多巴胺能神经元的选择性变性死亡以及在残存的神经元胞浆中出现以α-synuclein(α-SYN)为主要成分的淀粉样蛋白包涵体--Lewy小体。已有大量的研究证据表明α-SYN的异常聚集在PD的发病和Lewy小体的形成中发挥了关键作用。另一个与PD的发病密切相关的蛋白DJ-1,则对α-SYN的异常聚集具有抑制作用,但目前对于α-SYN与DJ-1之间是否存在直接的相互作用还存在争议。利用蛋白质组学的技术分别寻找与α-SYN和DJ-1相互作用的蛋白中,发现了一个共同的蛋白一线粒体应激蛋白—mortalin,进一步的研究发现mortalin在PD病人脑黑质部位的线粒体富集的组分中的表达较对照组显著下降,在细胞浆中显著增多。在过表达mortalin的多巴胺能细胞系中,线粒体复合物Ⅰ抑制剂---鱼藤酮(帕金森病的常用致毒剂)诱导后细胞毒性增强,相反在抑制mortalin表达后,鱼藤酮诱导的细胞毒性反而降低,提示mortalin在调节鱼藤酮诱导的细胞毒性中起到重要作用。最新的研究结果表明,mortalin可能在Lewy小体的进行性发展中发挥了重要作用。这些结果都提示mortalin可能在PD的发展中发挥重要的作用,但是mortalin在PD发病机制中的具体作用有待进一步研究。目的(1)进一步明确mortalin与α-SYN之间是否存在体外相互作用;(2)如果两者存在相互作用,进一步明确α-SYN的两个主要致病突A53T、A30P对于mortalin与α-SYN的体外相互作用有无影响。方法(1)构建α-SYN的WT及A53T、A30P突变的GST融合蛋白表达载体;(2)表达纯化GST融合蛋白;(3)运用GST Pull-down的方法沉淀大鼠脑组织中的mortalin,并用Westernblotting检测,半定量比较WT与突变型α-SYN与mortalin之间相互作用有无区别,来判断A53T、A30P突变对于α-SYN与mortalin的相互作用有无影响。结果Ⅰ.GST Pull-down的实验可观察到在WT与A53T、A30P组,GST融合蛋白均可将脑组织中的mortalin沉淀;Ⅱ.等量的A53T、A30P突变型GST融合蛋白沉淀的mortalin的量较野生型明显减少,统计结果显示有显著性差异。结论Ⅰ.α-SYN与mortalin之间存在体外相互作用;Ⅱ.α-SYN的两个主要致病突变可导致α-SYN与mortalin之间的相互作用变弱。