猪场常见细菌对消毒剂抗性及抗生素压力下金葡菌胞内动力学研究

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为探究猪场常见细菌对消毒剂的敏感性和抗性,以及在抗生素压力下金葡菌的胞内动力学,本研究通过悬液定量杀灭试验评估进口过硫酸氢钾复合物(A)、国产过硫酸氢钾复合物(B)和国产戊二醛-癸甲溴铵(C)对四种常见菌(大肠杆菌、沙门菌、链球菌及金黄色葡萄球菌)的杀灭效果。将四种细菌在消毒剂压力下连续传代,通过测试每代MBC和MIC来评估其是否产生抗性。在不同时间点对金葡菌与猪肺泡巨噬细胞共培养物进行细胞内和细胞外的金葡菌活菌计数,并采用q RT-PCR方法检测与胞内金葡菌生存密切相关的15个基因m RNA表达量的变化。结果显示,在4℃、25℃及37℃下,消毒剂A(1:200)、消毒剂B(1:400)在1-5 min内可以完全杀灭四种细菌;消毒剂C在15-30 min内可基本杀灭四种细菌。在评估细菌对消毒剂的抗性试验中发现,三种消毒剂的MBC是第1代的0.5-16倍。金葡菌胞内生存试验中,胞内金葡菌3 h活菌计数为1.03×10~4CFU/m L,13 h为1.59×10~5CFU/m L。q RT-PCR结果显示,内化3 h后的胞内金葡菌有5个基因表达上调,10个基因表达下调;13 h后有3个基因表达上调,12个基因表达下调。依据相关文献提示三个基因arg A,Hla和sod A与胞内金葡菌生存机制相关。结论:三种消毒剂在其推荐浓度下对四种细菌均有良好的杀灭效果。在连续传代后,大肠杆菌和沙门菌对过硫酸氢钾复合物基本无抗性,链球菌和金黄色葡萄球菌对消毒剂均出现不同程度抗性。金葡菌可入侵猪肺泡巨噬细胞并持续性存在。
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