温和气单胞菌单克隆抗体的制备及初步应用

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温和气单胞菌是广泛存在于水体中的致病菌,能单独引起鱼类发病或与嗜水气单胞菌共同引起鱼类的败血病,给水产养殖业带来巨大的经济损失。迅速、准确地诊断疾病,检测出该病原菌,是防治该菌感染的关键。目前,国内外检测鱼类细菌性病原主要依赖于细菌培养鉴定和PCR检测,这两种方法均需要专业人员操作,操作复杂,费时,成本比较高,不便于在现场检测。本实验利用杂交瘤技术制备了5株可稳定分泌抗温和气单胞菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对其进行鉴定、纯化;在此基础上建立了检测温和气单胞菌的单抗胶体金试纸条法,从而达到快速、简单、方便检测温和气单胞菌的目的。 首先,以AS免疫Balb/C小鼠,四免后以AS包被酶标板,用间接ELISA法检测小鼠血清。尾静脉注射加强免疫后取效价最高的小鼠的脾脏细胞,利用50% PEG 4000将其与SP2/O细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞。经过对培养上清的筛选和杂交瘤细胞的克隆化,最终得到5株能分泌AS抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为:1A4、2C7、3G9、3D5和2G3。对制备的5株杂交瘤细胞进行特异性鉴定,结果显示2G3、1A4只与温和气单胞菌发生反应,与它参考菌株无反应,具有较强特异性。经单抗亚类试剂盒测定,3株单克隆抗体2G3、1A4和3G9蛋白均为IgG,亚类分别为:IgG2_b,IgG1,IgG1。间接ELISA测定2G3、1A4腹水效价分别为1×10~6、1×10~4。相加试验表明
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