dsRNA可以引发基因沉默的现象首先是在Caenorhabditis elegans上发现的，这是一种特异的转录后的基因沉默现象，这种现象已经在动物和植物中被广泛应用。最近以来，dsRNA诱导基因沉默已被作为一种可靠的手段用来分析基因的功能，尤其是在Caenorhabditis elegans中。然而，RNAi的手段用在哺乳动物细胞上却遇到了困难，即长度超过30个核苷酸的dsRNA可以引起哺乳动物细胞产生抗病毒反应，而不能发挥抑制基因表达的功能。这个困难后来被Elbashir和Lipardi解决了，他们使用长度为21个核苷酸的siRNA在哺乳动物细胞中产生了抑制基因表达功能的现象，这个长度的siRNA可以抑制哺乳动物细胞中基因的表达，但不至于引发细胞的抗病毒反应。RNAi的靶位识别是一个有着高度序列特异性的过程，即便有一个核苷酸的改变，实验过程中都检测不到RNAi现象。在哺乳动物细胞中建立RNA干扰技术，可以用于研究某些特定基因的功能，从而可以解决某些疾病的发病机制。如果对小双链RNA中改变1个核苷酸，就可使该RNAi靶向基因沉默作用消失，这样，就有可能将这一技术用于抑制某些过度表达基因的表达，而不影响正常基因的表达。所以在肿瘤的基因治疗方面，RNA干扰技术具有深远的意义和广阔的应用前景。 细胞的程序性死亡（细胞凋亡）是细胞在进化过程中保留下来的功能。然而许多癌细胞却缺乏这种基因自我调节凋亡的能力，这可能是导致癌细胞无限增殖的原因之一。Bcl-2是1984年Tsujimoto等从滤泡性淋巴细胞淋巴瘤中分离出来的一种癌基因，该肿瘤有14号和18号染色体的易位，t（14；18）（q32；q21），18号染色体上的Bcl-2基因易位到14号染色体上，与免疫球蛋白重链基因串联形成融合基因，从而使Bcl-2基因在B细胞中异常表达，这种异常表达在淋巴瘤中起着重要作用。Bcl-2是bcl-2蛋白家族的成员之一，它由239个氨基酸残基组成，其分子量为26kD的线粒体膜蛋白，也是调节细胞凋亡的蛋白之一。在许多实体肿瘤包括乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌的发生、发展和转移过程中都发挥着重要作用。1988年，Vaux等将Bcl-2基因转入骨髓细胞使其在细胞中高表达，结果导致肿瘤的发生，并发现该细胞的生存时间明显延长，而细胞的增殖率没见明显增加。因此目前认为bcl-2基因是一种新类型的癌基因，它不影响细胞的增殖，而是作为细胞凋亡的一个潜在抑制剂调节细胞的死亡。最近研究结果证实，抑制bcl-2基因的表达可以用来治疗恶性肿瘤。为了使bcl-2基因在恶性肿瘤细胞中表达降低，促进肿瘤细胞的凋亡，就必须使bcl-2基因在转录或翻译的任何一个环节被阻断，所以，通过这些转录形成的小双链RNA可以靶向作用于bcl-2基因的mRNA，阻断其翻译的过程，从而达到使bcl-2基因表达降低的结果，实现治疗肿瘤的目的。 在本研究中，我们选择了人bcl-2 mRNA的一段基因，设计合成了其siRNA（siRNA-bcl-2）；并构建了含有该siRNA基因的、可以表达产生发夹状bcl-2siRNA的表达质粒（pSilencer 3.1H1-bcl-2）。对siRNA-bcl-2以及pSilencer3.1H1-bcl-2进行抑制肿瘤细胞中bcl-2蛋白的表达及促进细胞凋亡的实验，发现siRNA-bcl-2和pSilencer 3.1H1-bcl-2在体外都能显著地抑制肿瘤细胞中bcl-2基因的表达，并能明显促进细胞的凋亡。在pSilencer3.1H1-bcl-2的抑制小鼠H22肝癌细胞的在体实验中，当pSilencer 3.1H1-bcl-2的用量为0.8mg／只／天，连续尾静脉注射7天后，实验小鼠的肿瘤的抑瘤率达66.5％，并发现pSilencer 3.1H1-bcl-2能明显促进H22细胞的凋亡。在本研究中，我们还构建了含可以产生bcl-2 siRNA的双向表达的载体，这为siRNA的研究提供了一些有益的探索。