肝脏是机体内物质和能量代谢最旺盛的器官之一,因此其对缺血缺氧的敏感度很高。所以在肝外科手术过程中,由于血供的阻断和恢复导致的I/R损伤是引起肝脏损伤的重要因素。而近年相关研究表明,ERS在肝I/R损伤中扮演重要角色。因此,通过干预ERS的反应水平有可能成为治疗肝脏I/R的新方法。ADSC-CM来源于ADSCs,含有多类活性物质,可以在多种损伤中发挥保护效应。近年来研究发现ADSCs可通过抑制氧化应激、凋亡和ERS来减轻肝I/R损伤,而关于ADSC-CM对于肝I/R合并部分切除术中ERS和脂合成代谢影响的研究尚未有报道。本研究采用腹腔镜微创技术建立了小型猪肝脏I/R合并部分切除损伤模型,并用ADSC-CM干预,通过观察肝细胞超微结构和检测ERS和脂合成代谢相关指标的变化,探究ADSC-CM对于该模型中ERS和脂合成代谢的影响。实验选取24头20～30 kg的4～6月龄健康巴马小型猪,随机分为模型组(IRI组)、基础培养基对照组(DMEM组)、脂肪间充质干细胞条件培养液组(CM组)和脂肪间充质干细胞组(ADSCs组),每组6头。各组均在腹腔镜下进行右半肝缺血60 min合并左半肝切除手术,术后即刻四组分别于肝脏局部注射等量的生理盐水、DMEM培养基、ADSC-CM和ADSCs。分别于术前、术后1 d、3 d和7 d采集血清样品和肝脏组织。观察肝细胞超微结构和油红O染色的变化,检测血清中脂合成代谢指标(TG、CHOL、HDL-C、LDL-C)的变化,ELISA法检测肝脏中脂合成代谢指标(TG、CHOL、HDL、VLDL、ACC1)的变化,q RT-PCR检测肝脏组织ERS相关基因(GRP78、ATF6、IRE1、PERK、ATF4、CHOP)m RNA和脂合成代谢相关基因(SREBP1、SCAP、LXR、FASN、ACC1、HMGCR、HMGCS1、HMGCS2)m RNA相对表达水平的变化,Western Blot法检测肝脏组织ERS相关蛋白(GRP78、ATF6、XBP1、e IF2α、ATF4、CHOP、JNK)相对表达水平的变化。实验结果如下:(1)肝细胞超微结构的观察结果显示,IRI组和DMEM组术后细胞核膜皱缩,染色质边集化严重,内质网严重扩张。ADSC-CM或ADSCs干预后,肝细胞核变化和内质网扩张轻微。(2)与术前相比,术后四组肝脏组织中GRP78、ATF6、IRE1、PERK、ATF4和CHOP的m RNA相对表达水平均显著升高;而相比于IRI组和DMEM组,ADSC-CM和ADSCs干预均可以显著减少上述基因的表达,且两个干预组的上述m RNA相对表达水平均无显著性差异。(3)术后四组肝脏组织中GRP78、ATF6、XBP1、p-e IF2α、ATF4、CHOP和p-JNK的蛋白表达呈现上升趋势;而相比于IRI组和DMEM组,ADSC-CM和ADSCs干预均可以显著减少上述蛋白的表达,抑制肝脏I/R合并部分切除损伤中的ERS反应水平,且两个干预组的上述蛋白表达均无显著性差异。(4)油红O染色的观察结果显示,IRI组和DMEM组术后肝细胞脂肪变性严重,肝细胞结构不清晰,CM组和ADSCs组肝细胞形态基本正常,脂变轻微。(5)与术前相比,术后四组血清中TG、CHOL、HDL-C和LDL-C含量均呈下降趋势;而相比于IRI组和DMEM组,ADSC-CM和ADSCs干预均能显著抑制血清中上述指标的下降。与术前相比,术后四组肝脏中TG、CHOL、HDL、VLDL、ACC1含量均呈升高趋势;而相比于IRI组和DMEM组,ADSC-CM和ADSCs干预都可以显著抑制TG、CHOL、HDL、ACC1含量的升高,同时显著升高VLDL含量,维持肝脏脂质的稳态。两个干预组血清和肝脏中的上述指标均无显著性差异。(6)与术前相比,术后四组肝脏组织中SREBP1、SCAP、FASN、ACC1、HMGCR、HMGCS1、HMGCS2的m RNA相对表达水平均显著升高;而相比于IRI组和DMEM组,ADSC-CM和ADSCs干预都可以显著减少上述基因的表达,减少肝细胞脂质合成。且两个干预组的上述m RNA相对表达水平均无显著性差异。但LXR的m RNA相对表达水平在组间和时间上均无明显变化,说明LXR可能不参与该模型中脂合成代谢的调节。综上所述:(1)ADSC-CM能显著减轻小型猪肝细胞超微病理变化,减轻肝细胞脂肪变性,维持肝细胞结构正常,对小型猪肝脏I/R和部分切除损伤发挥保护效应。(2)ADSC-CM能抑制ERS核心蛋白和下游三条分支通路信号分子的过表达,并抑制ERS凋亡通路的表达。(3)ADSC-CM能抑制肝细胞脂质合成中关键调控因子和下游调控因子m RNA的表达,减轻肝细胞脂质沉积。(4)ADSC-CM干预在小型猪I/R合并部分切除模型中对于肝细胞ERS和脂质蓄积的保护效应同ADSCs无显著性差异。