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前言 恶性肿瘤的生长和转移需要得到充足的营养物质，这需要血液的运送才能得以实现。因此血管生成对肿瘤的生长和转移非常重要。目前已知血管内皮生长因子(VEGF)是最有力的血管生成因子，通过与其特异性受体Flt-1、KDR(在鼠的同源序列为Flk-1)结合来发挥作用，其中KDR是与细胞增殖及有丝分裂密切相关的受体。已有研究表明，VEGF及其受体在包括乳腺癌、消化道肿瘤、泌尿生殖系统肿瘤、脑肿瘤以及头颈部肿瘤在内的多数肿瘤中的表达明显增高，并与其生物学行为相关。本研究应用半定量RT-PCR方法检测10例正常子宫内膜，8例子宫内膜不典型增生，30例子宫内膜癌组织中KDR mRNA的表达，以探讨其与子宫内膜癌发生、发展及生物学行为的关系。 资料与方法 一、资料来源 选择中国医科大学附属一、二院2000年9月——2002年6月期间收治的患者48例。其中经手术后病理证实的子宫内膜癌(Endometrial carcinoma)患者30例，经手术或诊刮后病理证实的子宫内膜不典型增生(Hyperplasia endometrium)患者8例及正常子宫内膜(Normal endometrium)10例[分泌期(secrectory endometrium)5例，增生期(proliferative endometrium)5例]。所选患者均为初治病例，平均年龄48.37±12.04岁。按国际妇产科联盟(FIGO)1988年手术病理分期标准，其中Ⅰ期16例，Ⅱ期6例，Ⅲ、Ⅳ期8例；病理分级Q级17例，GZ级8例，G3级5例；有淋巴结转移5例；伴有深肌层浸润12例；腺癌22例，其它类型癌8例。 二、主要试剂 KDR及内参照引物由北京奥科生物责任有限公司合成； RT－PCR试剂盒由日本 TaKaRa公司提供； 提取总RN A的TRI zol试剂由美国Pro mega公司提供； 电泳用琼脂糖由沈阳联星生物公司提供。 三、方法 1．采取TRIZOI一步抽提法提取总RNA。 2．逆转录合成 CDNA。 3．PCR扩增： KDR引物序列女下： PIS’一TAT ATA TGG TGT AAC CCG GA—3’ p 5’一TI’T GTC ACT GAG ACA GCT TGG—3’ 扩增片断大小为555hp。 内参照p－actin弓物序列女下： PIS’一TGT ATG CCT CTG GTC GTA CCA C—3’ PZ 5’一 ACA GAG TAC e CGC TCA GGA G—3’ 扩增片断大小为690hp。 PCR扩增时间：预变性95℃905，变性94℃455，退火59t45s，复性 72℃90s，循环 35次后 72℃延伸 10ndn。 4．电泳：PCR扩增产物在2％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下拍照，在KODAK电泳凝胶成像及自动分析系统摄像、打印并检测各扩增带的产物含量。 5．结果判定：在电泳PCR产物中出现555hP的分子条带及内参照p－actin690bP分子条带为阳性结果，如仅出现内参照p－actin690bp分子条带为阴性结果。KDR mRNA的相对含量通过电泳后条带密度与内参照密度比值进行计算，计算公式为：KDR mR－ ·2·NA相毗量一（KDR密度／p－achn密度）x 100。 6．统计学分析：应用SppS 10．0软件进行统计学处理。KDRmRNA表达率比较采用 X‘检验或 Fisher’s精确概率法分析，相对含量比较采用方差分析或t检验。 结 果 一术DR mRNA在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生、正常子宫内膜组中的表达率分别为73．33％在5．00％和20．00％，子宫内膜癌组表达率高于其它两组（均为 P＜0．05＊子宫内膜不典型增生组与正常内膜组比较差异无统计学意义件＞0．05八 二、KDR mRNA相对含量子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生。正常子宫内膜组分别为118．08 215．68、97．59L10．88和80．255ZI．38。子宫内膜癌组高于其余二组h＜0．of厂差异有显著性；子宫内膜不典型增生组高于正常子宫内膜组，但差异无统计学意义河＞o．05人进一步分析发现增生期组相对含量明显高于分泌期组。 三、KDR mRNA表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系：KDR mRNA的表达率与子宫内膜癌的临床病理特征无关h＞0．05h其相对含量与子宫内膜癌的某些临床病理特征有关系，即手术病理分期＊＊V期高于二期k＜0．05人有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组k＜0．05入低分化组高于高分化组h＜0．05入而与肌层浸润及病理类型无明显关系。 ·3· 讨 论 一术DR的结构和功能 KDR是VEGF的特异性受体之一，是从人脐静脉内皮细胞CDNA链克隆获得的血管内皮细胞酪氨酸激酶受体。KDR基因定位于人的4号染色体NP3．2－P32L基因全长5821hP，其结构包括三部分，其中VEGF结合到KDR胞外区的免疫球蛋白样结构域上另！起KDR胞内激酶区特定酪氨酸残基的交叉磷酸化而活化，活化的受体进而被含有 SHZ结构的适配分子如 G地等结合，通过一系列生化级联反应，最终完成VEGF相应的促增殖作用，进而在血管的发生、生长中发挥重要作用。 二、子宫内膜不典型增生组 KDR mRNA表达和正常子宫内膜组比较无显著性差异，但子宫内膜不典型增生组相对含量仍高于