养阴清热祛湿方及各拆方抑制人肺腺癌细胞A549PDGFRa-PLC-γ1信号转导的研究

来源 :河南中医学院 河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ZHIWEINIU
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目的:通过观察养阴清热祛湿方(H)及各拆方(北沙参、石斛Y,蚤休、鱼腥草R,五加皮、萆薢Q,北沙参、石斛、蚤休、鱼腥草YR,北沙参、石斛、五加皮、萆薢YQ,蚤休、鱼腥草、五加皮、萆薢RQ)对肺腺癌细胞A549增殖抑制和PDGFRa-PLC-γ1-PKCa信号转导通路的影响,研究养阴、清热、祛湿法治疗肺腺癌的机理,探讨阴虚、热毒及痰湿与肺腺癌病变和PDGFRa-PLC-γ1-PKCa信号转导的关系。 方法:采用人肺腺癌A549细胞为实验对象,用倒置显微镜观察细胞生长情况,并计算细胞抑制率,筛选出有效的药物;用正交试验优选出疗效最好的方剂;设对照组和用养阴清热祛湿全方及其六个拆方处理细胞,在倒置显微镜下观察A549细胞生长状态改变,用Westernblot检测A549细胞PDGFRa-PLC-γ1-PKCa信号转导通路各蛋白表达的影响。 结果:1养阴清热祛湿全方及各拆方对A549细胞增殖明显抑制,对细胞形态作用明显不同,养阴组细胞可见细胞皱缩,透光度减小,形态不规则,细胞间基质呈现丝网状,贴壁性变差;清热组细胞表面逐渐粗糙,继而胞质内充满多量颗粒状物质,然后出现空泡样变化;祛湿组细胞皱缩,呈长条形,细胞间隙加大,胞质粗糙;全方组及其它拆方组细胞形态与清热组、祛湿组相似,培养基中可见有较多的细胞碎片。2养阴清热祛湿全方及各拆方均能抑制A549细胞的生长,全方作用最强,随药物浓度的增加,对细胞生长抑制呈现剂量—效应依赖关系。3人肺腺癌A549细胞可检测到PDGFRa、PLC-γ1、PKCa蛋白分子的过度表达。4当用IC50药物剂量处理细胞时,养阴清热祛湿全方及各拆方均能抑制PDGFRa-PLCγ1-PKCa信号通路各蛋白表达水平,其作用强弱依次为:H>RQ>YR>YQ>R>Q>Y。 结论:1养阴清热祛湿全方及各拆方均能明显抑制人肺腺癌细胞A549生长,全方组效果最好,表明养阴、清热、祛湿三法联用具有协同作用。2肺腺癌发病和PDGFRa-PLC-γ1-PKCa转导通路信号增强密切相关。3养阴清热祛湿全方及各拆方均能下调A549细胞PDGFRa-PLC-γ1-PKCa信号通路各蛋白表达水平,表明养阴、清热、祛湿及三法联用正是通过抑制PDGFRa-PLC-γ1-PKCa信号转导途径而抑制肺腺癌细胞增殖。4通过药效反证,在肺腺癌病变中,阴虚、热毒、痰湿与PDGFRa-PLC-γ1-PKCa信号表达和转导增强密切相关。5肺腺癌治疗应以养阴清热祛湿为治疗大法,扶正祛邪,虚实同治。
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