内生真菌HND5挥发性物质的分离鉴定及其抑菌活性分析

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枝顶孢属(Acremoniu sp.)真菌HND5是本实验室分离自珊状臂形草叶片中的一株新内生真菌。该菌株产生的挥发性物质对多种病原真菌及根结线虫具有明显的抑菌活性和致死作用。本研究通过固相微萃取(SPME)结合气质联用(GC/MS)技术,收集并鉴定HND5产生的挥发性物质,并对其对3种主要热作病原真菌的抑菌活性进行了分析。获得以下研究结果:采用3种不同规格的SPME萃取头分别对HND5的挥发性物质进行了萃取富集,通过气质联用鉴定出HND5菌株产生的挥发性物质组分34种。依据各组分不同性质可分为烯烃类、烷烃类、萘衍生物、芳香族化合物、酮类、醇类、卤代酸类、哌啶类、吡啶类和氨基丙胺类等10类。利用购置的挥发性物质纯品,分别对尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum、胶孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides和多主棒孢菌Corynespora cassiicola 等 3 种主要热作病原真菌进行了抑菌活性测定,获得4-乙烯基-1,2二甲氧基苯、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚和石竹烯等3种物质对供试病原菌具有熏蒸抑菌作用。三种物质对供试病原菌的抑菌活性依次为4-乙烯基-1,2二甲氧基苯>2-甲氧基-4-乙烯基苯酚>石竹烯,且对尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌和多主棒孢菌的EC50分别为:4-乙烯基-1,2 二甲氧基苯的 EC50 分别是 62.72 μL/L、27.60 μL/L 和 23.54 μL/L, 2-甲氧基-4-乙烯基苯酚EC50分别是36.75 μL/L、34.56 μL/L和62.58 μL/L,石竹烯的EC50分别是 2916.07 μL/L、729.54 μL/L 和 404.23 μL/L。三种活性物质对Foc4和CG01孢子萌发的抑制率随活性物质的浓度和处理时间的增加而提高。Foc4和CG01病菌孢子经三种活性物质处理12 h后,参试浓度抑制孢子萌发能力均为4-乙烯基-1,2二甲氧基苯>2-甲氧基-4-乙烯基苯酚>石竹烯,尤其是高浓度的4-乙烯基-1,2-二甲氧基苯和2-甲氧基-4-乙烯基苯酚处理的CG01孢子几乎不能萌发。经3种挥发性活性物质处理后,三种供试菌株细胞膜均受到破坏;Foc4菌丝形态出现不同程度的膨大、分支增多、扭曲、分节、干瘪等畸形现象。采用EC50浓度的三种挥发性物质接种前处理和接种后处理等两种方法,分别对CG01和CC01菌株的致病力测定结果发现,4-乙烯基-1,2-二甲氧基苯和2-甲氧基-4-乙烯基苯酚两种挥发性活性物质无论是在接种前或接种后处理CG01和CC01,其致病力均明显降低;但是,石竹烯在接种前或后处理CG01时,致病力与对照相比未见明显差异,处理CC01菌株,致病力有所降低。三种挥发性活性物质处理土壤后,采用PCEA平板观察计数土壤中Foc4孢子的含量,结果发现,4-乙烯基-1,2-二甲氧基苯和2-甲氧基-4-乙烯基苯酚两种物质均能明显降低土壤中Foc4孢子的含量,数量可比对照降低达100倍的数量级;但经石竹烯处理后的带菌土壤,其孢子含量未见降低。
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