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本文以家蚕932蚕卵为材料,采用生物信息学、PCR、qRT-PCR、DLR与ELISA等方法,通过筛查与家蚕滞育密切相关的miRNA及其靶基因,分析其在滞育卵、即时浸酸卵、赤豆色浸酸卵的表达差异及调控作用,以进一步探索家蚕滞育发生与滞育解除的分子调控机理,取得主要结果如下:(1)利用生物信息学工具RNAhybrid等对蚕卵经浸酸后发生显著上调或下调的miRNA各4个进行分析,从中筛选出2个与家蚕滞育密切关联的bmo-miR-3384-3p与bmo-miR-2761-3p,并进行靶标预测,得知bmo-miR-3384-3p在候选靶基因BmNLK的3’UTR的11-64位碱基存在结合位点,而bmo-miR-2761-3p与BmSDH基因结合位点在其3’UTR的396-423位碱基。(2)通过PCR扩增技术,比较候选靶基因BmNLK、BmSDH在家蚕滞育性卵、赤豆色浸酸卵中的转录表达情况,经检测分析,当蚕卵经盐酸浸渍处理后,BmSDH基因和BmNLK基因发生显著上调现象,而在非浸酸卵中则处于低水平的表达状态,表明两基因在滞育性卵与浸酸卵中有明显的差异表达。(3)用qRT-PCR技术对滞育性卵与赤豆色浸酸卵在卵龄3-7d时bmo-miR-2761-3p、bmo-miR-3384-3p、BmSDH基因和BmNLK基因的表达水平进行定量分析,结果在浸酸卵中,bmo-miR-3384-3p、bmo-miR-2761-3p的相对表达量最低时分别比浸酸前下降了76%和78%,而BmNLK基因和BmSDH基因的相对表达量最高时则分别上调了217%和4287%。经统计分析,bmo-miR-2761-3p与BmSDH基因、bmo-miR-3384-3p与BmNLK基因的表达关系呈负相关性(R12=0.94,R22=0.92)。由此表明,蚕卵处在滞育状态时,BmSDH基因、BmNLK基因低水平表达,当蚕卵浸酸后则显著上调。(4)为验证bmo-miR-2761-3与BmSDH基因、bmo-miR-3384-3p与BmNLK基因的靶标关系,分别构建了含有BmSDH 3’UTR、BmNLK 3’UTR的载体,并经DLR法检测验证,证实了bmo-miR-2761-3p会抑制BmSDH基因的表达;bmo-miR-3384-3p会抑制BmNLK基因的表达。(5)借助ELISA方法测定了即时浸酸卵和赤豆色浸酸卵浸酸后至孵化前1d、滞育性卵于5℃冷藏0、10、20、30、40、60、80d期间的BmSDH酶和BmNLK酶的活性,结果蚕卵一经浸酸,酶活快速上调,即时浸酸卵、赤豆色浸酸卵在浸酸后经过2d BmNLK酶的活性就到达峰值,分别为2972.24 mU/g、2800.45 mU/g,比对照分别提高了13.26倍和12.43倍。BmSDH酶则于浸酸后经过3d时出现峰值,即时浸酸卵的为1003.36 mIU/g,赤豆色浸酸卵的为662.29 mIU/g,比对照分别提高了4.50倍和2.63倍。滞育卵在5℃冷库中冷藏时,入库初期酶活活性下降,当冷藏经过30d/20d时,酶活开始上调,到80d时,BmNLK酶和BmSDH酶活性到达最大值。由此表明,BmNLK酶和BmSDH酶的活性变化,与蚕卵的滞育解除存在联动关系。