【摘 要】
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该实验从菊芋块茎cDNA文库中获得了4个与菊芋凝集素cDNA序列具有高度同源性的cDNA序列hta-a、hta-b、hta-c、hta-d,为了鉴定这4个cDNA序列所编码蛋白的凝集素功能,该论文将它
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该实验从菊芋块茎cDNA文库中获得了4个与菊芋凝集素cDNA序列具有高度同源性的cDNA序列hta-a、hta-b、hta-c、hta-d,为了鉴定这4个cDNA序列所编码蛋白的凝集素功能,该论文将它们分别插入大肠杆菌表达载体pGEX4T-3中诱导表达.SDS-PAGE电泳结果表明,融合蛋白GST-HTA-a、GST-HTA-b、GST-HTA-c、GST-HTA-d都能被诱导正确表达,但可溶性有差异.凝血反应结果表明诱导表达的4个融合蛋白GST-HTA-a、GST-HTA-b、GST-HTA-c、GST-HTA-d都具有凝集血红细胞功能,进一步分离纯化得到了HTA-c、HTA-d.半抗原抑制凝血反应结果表明HTA-c、HTA-d能与甘露糖的结合活性高于其它受试糖类.上述实验结果充分说明这4个cDNA序列都编码具有凝集素功能的蛋白.将从大肠杆菌中表达纯化的目的蛋白HTA-d浓缩委托该所实验动物中心免疫新西兰兔制备了抗血清.Western杂交结果表明制备的多抗能与在大肠杆菌中表达纯化的HTA-c、HTA-d、天然的菊芋块茎凝集素识别,所制备的多克隆抗血清可应用于转菊芋凝集素基因植物的蛋白表达定性定量检测.
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