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目的：原发性肝癌（简称肝癌）是临床常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，预后差。在全球癌症发病率中居第5位，死亡率居第3位。在我国，肝癌发病人数约占全球的55%。目前肝癌首选手术治疗，但手术只适用于10%30%的早期肝癌患者,且治疗效果欠佳,绝大多数患者在术后2年内复发；而对于晚期肝癌患者，以介入治疗为主的化疗栓塞法亦不能明显改善其预后。近年研究表明，生物治疗,特别是分子靶向治疗在控制肝癌细胞增殖、预防和延缓复发转移及提高患者的生活质量等方面具有独特的优势，并成为研究热点。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）是一个结构相似的生长因子家族，目前已发现的VEGF家族成员有7个，分别是VEGF-A（即通常所指的VEGF）、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F和胎盘生长因子（Placenta growth factor, PLGF）。它们都是同源二聚体糖蛋白，具有相似的空间结构。VEGF家族主要作用于血管和淋巴管内皮细胞，通过其特异性的膜受体介导实现其生物学效应，具有促进内皮细胞增殖、增加微血管通透性、诱导血管生成等多种功能，与肿瘤的生长、转移密切相关。大量的实验研究已证实,大部分恶性肿瘤都有VEGF家族成员的表达，而在正常组织中没有或仅有极低水平的表达。RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指生物体内由双链RNA（double-stranded RNA, dsRNA）介导的序列特异性转录后基因沉默（post-transcriptional gene silencing, PTGS）现象，是一种dsRNA分子在mRNA水平上封闭相关基因表达的过程。然而，体外合成的长链dsRNA会产生细胞毒反应,短链RNA（2123nt）即小干扰RNA（small interferenceRNA, siRNA）可避免该情况发生。研究表明,体外合成的siRNA与内源性siRNA一样，能够发挥分解靶mRNA特异性沉默靶基因的功能。随着对肿瘤发生发展机制的研究和生物技术的发展，肿瘤基因治疗、分子靶向治疗已成为肿瘤治疗的重要发展方向，RNAi技术也在人类基因功能研究和药物靶点鉴定等方面备受青睐，并具有潜在临床应用价值。本研究应用RNAi技术沉默VEGF-B基因，观察人肝癌细胞HepG2细胞VEGF-B蛋白的表达情况，进一步阐明VEGF-B表达与肝癌生物学特性的关系，以期为VEGF-B成为肝癌临床治疗靶点提供新的理论依据，也为最终阐明肝癌发生、发展的分子机制奠定实验基础。方法：常规培养人肝癌细胞HepG2细胞。以人VEGF-B基因序列（NM003377.3）为靶基因选取3个靶位点，分别构建3个针对靶位点的siRNA质粒表达载体（S1、S2和S3），同时合成一个阴性对照质粒表达载体（NC），这些载体均能表达绿色荧光蛋白（green fluorescence protein,GFP）。用脂质体转染法将载体转染入人肝癌细胞HepG2细胞；激光共聚焦显微镜观察转染效率；在转染后48小时，用Western blot技术检测HepG2细胞VEGF-B蛋白表达情况。结果：Western blot结果显示HepG2-S1、HepG2-S2、HepG2-S3目的基因蛋白染色条带与HepG2-NC相比减弱。定量分析结果显示HepG2-NC、HepG2-S1、HepG2-S2、HepG2-S3的VEGF-B蛋白表达水平分别为0.547±0.012，0.322±0.030，0.235±0.008，0.272±0.018。三个实验组细胞VEGF-B蛋白表达水平均显著低于HepG2-NC对照组（P<0.05）。每个实验组与对照组比较发现，任两组间总体均数差异均具有统计学意义（P<0.05）。因此，所构建的3个质粒表达载体HepG2-S1、HepG2-S2、HepG2-S3均能抑制肝癌细胞HepG2细胞VEGF-B蛋白的表达，其中，HepG2-S2抑制效果最强，HepG2-S3次之，HepG2-S1最弱。结论：体外构建的VEGF-B基因靶向siRNA转染肝癌细胞后，能够明显抑制人肝癌细胞HepG2细胞VEGF-B蛋白表达。