目的：兔MLCK cDNA表达载体的亚克隆，为探针的制备及原位杂交的研究奠定基础；探讨VitE对动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK活性及与膜通透性变化的影响。方法：提取Pat21—CMV5（B-）质粒，经限制性内切酶Hind Ⅲ、XbaⅠ双酶切，插入质粒pBKcmv中，构建为重组质粒pBKcmv-MLCK，阳性克隆在大肠杆菌中扩增后提取质粒，经限制性内切酶Hind Ⅲ、EcoRI双酶切，插入质粒pET28b中，获重组质粒pET28b-MLCK；复制兔动脉粥样硬化模型，利用γ-³²P掺入法检测动脉MLCK活性；动脉经O.C.T包埋、冰冻切片，利用免疫荧光检测动脉内膜通透性的变化，同时用HE染色观察动脉壁的形态结构。结果：重组质粒pBKcmv-MLCK限制性内切酶谱分析表明其酶切位点与原设计相符。重组质粒pET28b-MLCK中插入片段大小为405 bp，与设计一致。动脉粥样硬化兔模型建立成功，大白兔在喂食高胆固醇膳食4周或12周后，与正常对照相比血液中胆固醇和低密度脂蛋白的含量显著增加（P＜0.05，P＜0.01），胆固醇含量增加约达18—30倍，低密度脂蛋白增加约达22—61倍，而甘油三酯和极低密度脂蛋白的含量没有明显变化（P＞0.05）。喂高胆固醇膳食4周组，高密度脂蛋白增加约为对照组的2倍（P＜0.05），喂高胆固醇12周组动物的高密度脂蛋白含量与对照比较没有统计学差异（P＞0.05），但在加喂维生素E之后，血浆中高密度脂蛋白含量增加，约为对照组的2倍（P＜0.05）。另外，喂食12周同时加维生素E组，甘油三酯和极低密度脂蛋白浓度均升高（P＜0.05）。在喂高胆固醇4周的动物组，动脉组织MLCK活性与正常对照比较显著增强（P＜0.05）。但是，在喂高胆固醇膳12周或同时添加维生素E后，动脉组织MLCK活性与正常对照组比较增加不明显（P＞0.05）。荧光显微镜下观察显示，兔主动脉内膜通透性在喂食高胆固醇膳食后4周有所增多，12周后显著增加，12周组的膳食中同时加维生素E后，主动脉的通透性有所下降。 安徽医科大学硕士学位论文 朱华庆·2002年 HE染色显示，喂高胆固醇4周组的兔主动脉内膜增厚，细胞间隙增大并有少量 泡沫细胞形成，喂高胆固醇12周形成明显的动脉粥样硬化，在加维生素E对兔 主动脉内膜病变似乎有一定改善作用。结论：成功获得兔 MLCK叨NA亚克隆， 在动脉粥样硬化早期，内膜屏障完整性的改变可能与MLCK活性增强相关。 Vi iE可能是降低动脉内膜 MLCK的活性因素。AS的形成是山内皮细胞的向心性 收缩所致，VitE对动脉粥样硬化模型兔动脉内膜的通透性有一定的抑制作用。