枸杞多糖对雄性小鼠生殖系统的保护作用机制的研究

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:ytfeng
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随着社会的快速发展以及工作压力及生活负担加重,男性生殖障碍患者人群逐年增加。其精液中精子密度和精子质量存在普遍下降的趋势,不健康及畸形精子所占比例增加。雄性生殖过程完成的前提是健康完备的生精、无阻碍的精子转运以及附属性腺正常行使功能等。雄性生殖系统的功能受到细胞和内分泌系统功能地严格控制,对营养需求、环境条件、激素水平等都有精密的要求。精子发生过程受损和精子功能损伤是男性生殖系统障碍的主要表现特征。枸杞作为一种历史悠久的药用植物,其化学及营养成分多样,包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪酸、甾醇、维生素、色素类、生物碱类等。研究显示,枸杞多糖具有免疫调节、抗辐射、抗肿瘤、降低糖尿病患者血糖、增强造血功能、改善骨质疏松、预防脂肪肝、防衰老、神经调节、抗氧化及生殖保护等功能。有关枸杞多糖的制备提纯、理化性质鉴定、药理作用及临床应用都已有较为深厚的研究基础,枸杞多糖也在近年来展示出良好的应用价值。目前,关于枸杞多糖对动物免疫、调节血压、抗肿瘤、抗氧化损伤等方面研究较多,但枸杞多糖对人和动物生殖方面的研究较少。本论文主要从枸杞多糖对小鼠生殖方面的影响入手,深入挖掘枸杞多糖对不同因素造成的小鼠生殖障碍的干预作用进行探究,并通过初步的实验阐述枸杞多糖对生殖障碍的干预机制。首先,本研究探讨了LBP对环磷酰胺介导的雄性小鼠生殖器官损伤、精子质量下降的保护作用。将小鼠设置为对照组、CP模型组、以及LBP处理组进行饲养。在分别给药7天及14天后处死小鼠并称重,迅速剥离出小鼠的睾丸和附睾组织进行质量称重以计算脏器指数。随后,分离睾丸组织制备精子悬液和睾丸组织匀浆液,分别进行精子质量与氧化应激指标的检测。取出部分睾丸组织进行组织RNA的抽提和第一链cDNA合成,并利用RT-qPCR和蛋白电泳及免疫印迹的方法对细胞凋亡过程中Bax、Bcl-2、FasL、Caspase-3进行定量检测。研究结果显示CP处理显著降低雄性小鼠附睾和睾丸的脏器指数、精子质量和血液中睾酮浓度,并加剧小鼠睾丸组织的氧化应激损伤及细胞凋亡,造成细胞凋亡相关基因mRNA水平及蛋白水平的变化。加入LBP处理可以有效的将相关指标维持在正常水平附近,显著优于环磷酰胺处理组。随后本研究探讨了不同剂量的LBP对CP介导的睾丸氧化应激损伤及细胞凋亡的保护作用。将小鼠设置为对照组、环磷酰胺模型组、以及LBP处理组(梯度浓度)进行饲养。在给药7天后处死小鼠,分离睾丸组织制备睾丸组织匀浆液进行SOD、GSH-Px活性及MDA含量的测定。同时对睾丸组织组织凋亡相关基因进行RT-qPCR定量检测。酶活性及定量PCR实验表明CP处理显著降低雄性小鼠睾丸的SOD、GSH-Px活性及MDA含量,而LBP处理可以回复SOD、GSH-Px活性及MDA含量,且LBP浓度越高,对相关指标的干预越大。环磷酰胺处理可降低Bcl-2的表达并上调促凋亡基因Bax、FasL及Caspase-3的表达,加入一定浓度的LBP后可以使细胞凋亡相关基因的表达水平恢复到对照组水平,说明LBP对环磷酰胺介导致雄性小鼠氧化应激损伤及细胞凋亡的保护作用具有剂量依赖性。为了探究枸杞多糖对高温导致的小鼠生殖障碍的保护作用,将小鼠设置为对照组、高温模型组、以及LBP处理组(梯度浓度)进行饲养。在给药14天后处死小鼠并对小鼠阴囊进行高温水浴处理以建立高温应激小鼠模型。分离小鼠睾丸组织进行精子质量检测,SOD活性、MDA含量测定、细胞凋亡相关基因检测以及睾丸和附睾的脏器指数的测定。和对照组相比,高温模型小鼠的精子质量、SOD活性、脏器指数显著降低;高温处理会诱导生精细胞凋亡,并促进机体MDA累积。和高温处理组相比,加入枸杞多糖处理的小鼠其相关指标更加优异,证明。LBP对高温应激小鼠的生殖器官及氧化应激损伤及生精细胞凋亡具有一定的保护作用。最后,本研究探讨了LBP对慢性心理应激小鼠生殖障碍的保护作用。将小鼠设置为对照组、心理应激组、20%LBP、20%LBP+应激、60%LBP、60%LBP+应激进行饲养。处死小鼠并进行脏器指数测定、精子质量测定、血清睾酮、SOD酶活性及MDA含量的测定。和对照组相比,心理应激小鼠的脏器指数、精子质量、睾酮浓度和SOD酶活性显著降低,MDA沉积显著升高。而灌胃枸杞多糖的应激小鼠的相关数据相较应激小鼠有显著提升。
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