在体外受精和人工辅助生殖领域,精液如何更好地冷冻保存一直备受关注。冷冻精子复苏率是判断精子耐冻力的重要指标,然而该指标受多种因素的影响,如不同的季节、种公畜个体差异和生理状况等,这些因素均会影响精子蛋白质的浓度和组成。蛋白质是一切生命活动的承担者,用蛋白质组学的方法研究精子复苏率的影响机制成为研究热点,通过精液冷冻和复苏试验,对16只杜泊羊公羊精子冷冻复苏率进行检测,最终确定精子冷冻复苏率最高的3组和精子冷冻复苏率最低的3组。利用TMT联用LC-MS/MS的方法,鉴定差异蛋白质,并对差异蛋白质的表达情况进行GO,PPI和KEGG等生信分析,筛选影响冷冻精子复苏率的标志蛋白质,并分析差异蛋白质的功能,揭示影响精子冷冻复苏率的机制。主要结果如下:（1）冷冻精子复苏试验发现,高复苏率组精子平均复苏率为68.78%;低复苏率组精子平均复苏率为28.21%。（2）共鉴定到2464个蛋白质,其中2144个被定量。设定蛋白质差异倍数>1.2,score>20,特异肽段不少于2为差异表达条件,共鉴定到184个蛋白质显著差异;其中有112个蛋白质表达上调,72个蛋白质表达下调。分析差异蛋白质GO注释、通路富集和蛋白质互作关系,发现不同复苏率组之间的精子蛋白质存在差异,这些差异蛋白质涉及多个生物学过程。（3）高复苏率组精子中 S100A8、S100A9、S100A12、S100A14、S100A14 等钙离子结合蛋白通过控制Ca2+正调控精子活力;HYOU1参与抗精子凋亡;PRDX1参与抗氧化作用,防止细胞死亡;ENO1参与糖酵解途径,为精子提供营养。（4）低复苏率组精子中ME3参与精子新陈代谢;HSPA9对精子有致死作用;SOD1催化氧自由基;VDACs参与ATP和Ca2+转运;ADAM20抑制精卵结合,这些蛋白质在低复苏率组中富集,参与细胞老化、凋亡、免疫损伤、能量转运和氧化应激等。氧化磷酸化通路和产热通路在低复苏率组中富集,降低了冷冻精子复苏率。本研究对杜泊羊高复苏率组精子和低复苏率组精子进行了蛋白质组学分析,研究表明,影响杜泊羊精子冷冻复苏率的因素可能与精子蛋白质表达谱的差异有关,为精子冷冻复苏的标志物提供了参考依据。