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世界卫生组织(WHO)推荐青蒿素类药物联合疗法(ACT)治疗恶性疟疾。而在一些收入较低的发展中国家,相对于昂贵的现代抗疟药,廉价易得的中药黄花蒿被广泛应用于疟疾的预防与治疗。研究表明,与青蒿素单用相比,黄花蒿茶饮或口服黄花蒿的干叶不仅提高了青蒿素的生物利用度还增强青蒿素的抗疟活性。这些研究结果说明黄花蒿中的其它成分对青蒿素起到了抗疟增效的作用,但抗疟增效成分尚不明确,增效机制也缺乏报道。本文基于药物代谢主要研究了黄花蒿提取物对青蒿素代谢药动学的影响,同时考察了黄花蒿提取物对青蒿素的抗疟增效作用,以期揭示黄花蒿中对青蒿素发挥抗疟增效作用的成分及其增效机制。1.基于药物代谢研究黄花蒿提取物对青蒿素的抗疟增效作用当青蒿素用药剂量相同时,对口服黄花蒿提取物和单用青蒿素进行了比较:采用健康大鼠和小鼠动物模型研究了青蒿素及其三个主要的I相代谢产物的药代动力学特征;采用恶性疟原虫株(Plasmodium strain Pf3D7)模型研究了青蒿素的体外抗疟活性;采用约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染的小鼠模型研究了青蒿素的体内抗疟活性,并记录了给药后疟鼠的复发率和生存时间。与单用青蒿素相比,口服黄花蒿提取物时青蒿素在大鼠和小鼠体内的暴露量增加了 2-6倍;而青蒿素代谢为单羟基化青蒿素(由CYP3A4介导)的能力在单剂量给药时受到了抑制,在多剂量给药受到了诱导。与单用青蒿素相比(IC50 16.0 nM;ED50 6.8 mg/kg),黄花蒿提取物在体内表现出对青蒿素的抗疟增效作用(ED50 1.9 mg/kg),在体外没有明显的变化(IC50 17.1 nM)。实验结果表明,黄花蒿提取物对青蒿素的抗疟增效作用与青蒿素的吸收增加、代谢酶受到抑制相关。但是,当多剂量给药时,黄花蒿提取物对青蒿素的代谢酶产生了诱导作用从而加速了青蒿素的代谢,黄花蒿提取物的抗疟增效作用并不能降低疟鼠的复发率。2.基于代谢酶抑制研究黄花蒿中青蒿素的抗疟增效成分按照极性大小制备黄花蒿分段提取物(MAE-Ⅰ、MAE-Ⅱ和MAE-Ⅲ),采用健康大鼠模型研究口服各黄花蒿分段提取物时青蒿素及其单羟基化代谢产物的药代动力学特征;采用恶性疟原虫株(Plasmodium strain Pf3D7)模型研究各黄花蒿分段提取物中青蒿素的体外抗疟活性;采用约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染的小鼠模型研究各黄花蒿分段提取物中青蒿素的体内抗疟活性。经过对比,从目标分段提取物中分离提取主要的单体化合物,并进行酶抑制筛选实验。与单用青蒿素相比,口服黄花蒿分段提取物MAE-Ⅲ时青蒿素在大鼠体内的暴露量增加了 2倍;而青蒿素代谢为单羟基化青蒿素(由CYP3A4介导)的能力被抑制。从黄花蒿分段提取物MAE-Ⅲ中主要分离得到9个化合物,包括5个倍半萜类化合物,3个黄酮类化合物和1个酚酸类化合物,而这些化合物中,只有黄花蒿素B表现出对青蒿素代谢酶CYP3A4较明显的抑制作用(IC50 1.2μM)。3.基于药物代谢研究黄花蒿素B对青蒿素的抗疟增效作用采用健康小鼠模型研究青蒿素与黄花蒿素B联用时青蒿素及其单羟基化代谢产物的药代动力学特征;采用约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染的小鼠模型研究青蒿素与黄花蒿素B联用时青蒿素的体内抗疟活性,并记录给药后疟鼠的复发率和生存时间。与单用青蒿素相比,联用黄花蒿素B时青蒿素在小鼠体内的暴露量增加了 2倍;而青蒿素代谢为单羟基化青蒿素(由CYP3A4介导)的能力受到了抑制。并且黄花蒿素B在体内表现出了对青蒿素的抗疟增效作用,但这种增效作用并没有降低疟鼠的复发率。综上所述,黄花蒿素B是中药黄花蒿中对青蒿素起抗疟增效作用的主要成分之一,而增效作用的机制与黄花蒿素B可以增加青蒿素的吸收、抑制青蒿素的代谢酶(CYP3A4)活性相关。