第一部分人体胃液菌群分析目的:研究表明人体胃腔内存在很多通过适应了胃内环境而得以长期存在的细菌,而胃腔内菌群的变化则与人体的某些消化系统疾病息息相关。本研究采用传统实验室培养法和细菌的16s-r DNA检测的两种方法明确胃液内菌群的种类,确定有无致病菌,为后期TG-NOTES预防感染的研究奠定基础。方法:本研究采用临床试验的方法,提取2015年3月至2015年6月在长海医院消化内镜中心行常规胃镜检查诊断为浅表性胃炎40例患者胃腔内胃液,采用两种方法行细菌检测,一种送往本院细菌检测室(20例),进行细菌菌落数观察及菌种鉴定。另外一种由上海瑞翌生物有限公司通过测定细菌16s-r DNA方式代为检测(20例)。结果:我院细菌检测室培养出的细菌以革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌为主,包括:金黄色葡萄球菌、微黄奈瑟菌、粘滑罗氏菌、口腔/缓症链、芽孢杆菌、白色念珠菌等。16s-r DNA检测结果表明胃腔内的细菌前20种主要的细菌含量由多到少包括:普雷沃菌属(Prevotella)、Helicobacter(Hp)、奈瑟菌属(Neisseria)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、韦荣氏球菌属(Veillonella)、梭杆菌属(Fusobacterium)、卟啉菌属(Porphyromonas)、链球菌属(Streptococcus)、Saccharibacteria_genera_incertae_sedis、拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、纤毛菌属(Leptotrichia)、碳酸噬胞菌属(Capnocytophaga)、嗜酸乳杆菌属(SR1_genera_incertae_sedis)、颗粒链菌属(Granulicatella)、弯曲菌属(Campylobacter)罗氏菌属(Rothia)、回线属(Treponema)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)、杆菌属(Aggregatibacter)、放线菌属(Actinomyces)。结论:传统细菌培养法和16s-r DNA方法均提示胃腔内为有菌环境,且细菌种类较多,其中不乏致病菌。可见经胃自然腔道内镜手术(TG-NOTES)局部胃腔消毒具有明确的必要性。第二部分局部灌洗消毒剂对大鼠急性毒性观察目的:前期研究发现胃腔为有菌环境,局部灌洗消毒预防TG-NOTES手术感染具有确切效果,目前报道应用较多且消毒效果和安全性均较确切的局部粘膜消毒剂主要是洗必泰和聚维酮碘,然而目前尚无洗必泰和聚维酮碘应用于人体胃腔消毒的相关报道。本阶段研究目的为通过动物实验明确胃腔内局部灌洗洗必泰或聚维酮碘对SD大鼠有无急性毒性作用,为下一步应用于临床研究奠定基础。方法:本研究采用动物实验的方法,通过予SD大鼠经口分别灌注洗必泰、聚维酮碘以及生理盐水(20ml/kg),观察大鼠一般情况,胃粘膜及肝肾组织病理切片,以及血液指标(血常规、肝肾功能等),明确局部灌洗消毒剂对大鼠急性毒性反应。结果:口服给药1h,24h,48h,7天,14天后,大鼠未见死亡。观察大鼠一般情况,其行为活动、外观体征、呼吸、粪便性状及给药局部胃黏膜均未见明显异常。灌洗大鼠血液学指标检测结果表明,灌洗组大鼠无论雌性还是雄性其血常规指标及生化指标与对照组比较三组间差异均无统计学意义(p>0.05)。肝肾组织病理切片提示肝肾组织均无明显组织和结构破坏。灌洗后胃粘膜各层次结构完整,未见明显出血点及炎性渗出。结论:胃腔灌洗洗必泰或聚维酮碘对大鼠无急性毒性作用。第三部分洗必泰和聚维酮碘灌洗胃腔预防经胃自然腔道内镜手术(TG-NOTES)感染的临床研究目的:前期研究表明胃腔为有菌环境,存在灌洗消毒的必要性,同时动物实验证实局部灌洗洗必泰和聚维酮碘对SD大鼠无急性毒性作用。本部分研究的目的是通过临床试验明确人体胃腔内局部灌洗洗必泰和聚维酮碘前后胃腔菌群的变化情况,明确TG-NOTES手术中局部胃腔灌洗洗必泰和聚维酮碘是否可以预防感染,同时比对两种消毒剂的消毒效果,明确效果最佳的消毒剂。方法:本研究采用临床试验的方法,以2015年3月至2015年6月在长海医院消化内科常规行胃镜检查诊断为浅表性胃炎的40例病人,聚维酮碘灌洗组20例,洗必泰灌洗组20例,患者取侧卧位,常规静脉麻醉后,应用Olympus GIF-260灭菌胃镜常规进镜至胃腔,留取胃腔内消化液20ml(标本A);吸除胃腔内残存液体,然后分别使用洗必泰溶液、聚维酮碘各300ml喷洒灌洗,维持5min后,再用无菌生理盐水100ml冲洗胃腔,留取冲洗液20ml(标本B、标本C)。标本送检细菌培养及鉴定。术后24h观察患者有无腹痛、恶心、呕吐等消化道不适症状。结果:所有患者均顺利完成常规胃镜检查术。我院细菌检测方法无论是聚维酮碘组还是洗必泰组灌洗消毒后均未检测到细菌,16s-r DNA检测方法结果表明洗必泰和聚维酮碘灌洗后,细菌种类和丰度较灌洗前明显降低。显著性差异方面:消毒后胃腔内致病菌种类较消毒前明显减少,两种消毒剂组间差异性分析未见OTU水平的差异,未找到属水平差异,也未找到所有水平差异。洗必泰组患者无任何不适,聚维酮碘组(3/20)出现2例恶心及1例呕吐,未予治疗后自行缓解。两组间比较差异无统计学意义,两种消毒剂副作用情况无差异。结论:TG-NOTES术前使用洗必泰或聚维酮碘溶液灌洗胃腔预防感染效果确切,灌洗后胃腔内细菌明显减少,基本达到无菌状态。此外,两种消毒剂安全有效,副作用小。第四部分新型缝合夹和传统闭合夹在经胃自然腔道内镜手术(TG-NOTES)切口闭合疗效的对比研究目的:胃壁切口闭合的质量是影响TG-NOTES术后感染的重要因素,目前应用于NOTES手术切口闭合有多种方法,效果不一。本研究拟采用动物试验的方法,对比现有的单纯金属闭合夹和新型缝合夹的闭合效果。方法:12只雌性实验猪,常规胃窦部位黏膜全层切除,创面穿透至腹腔模拟TG-NOTES,病灶切除范围直径3-5cm,6例应用金属夹夹闭,6例应用新型缝合夹,对比评估夹闭时间、夹子数量、实验动物的存活情况、术前术后胃腔细菌菌落计数、术后血常规白细胞及术后体温波动情况。结果:常规黏膜全层切除术后,缝合夹组夹闭时间平均为8.54min;夹子数量平均4.16个;普通金属夹组夹闭时间平均为10.73min,夹子数量平均8.66个,普通金属夹组出现1例死亡,余全部存活。两组术后血常规白细胞及体温情况差异无统计学意义。两种消毒剂灌洗后术前术后菌落计数有明显统计学意义。结论:新型缝合夹无论是在夹闭时间还是夹子使用数量,在闭合大切口方面均较普通金属夹组具有明显优势,具有良好的临床应用前景。