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环境胁迫会使植物细胞中积累大量的活性氧,如果这些活性氧得不到有效清除就会对植物造成伤害。抗坏血酸过氧化物酶是植物体内酶促脱毒系统的重要酶类,它是一个含血红素的蛋白,主要清除植物体内的H2O2,从而提高植物体在抗逆方面的能力。本研究以741毛白杨为材料,克隆得到了三个APX基因(同源基因分别位于毛果杨染色体LG-Ⅱ、LG-Ⅴ、LG-Ⅸ、上)的启动子序列,完成了四个APX基因(同源基因分别位于毛果杨染色体LG-Ⅱ、Scaffold-57、LG-Ⅴ、LG-Ⅴ上)的原核表达,对其中两个APX基因(位于染色体LG-Ⅱ、Scaffold-57上)进行了酶学特性的研究,并分析了APX基因(位于染色体Scaffold-57上)在7-8年生毛白杨不同组织部位的表达量。主要的研究内容和实验结果如下：1.APX基因启动子克隆：运用电子克隆的方法,结合毛果杨基因组序列,推断出毛果杨的APX基因启动子序列。再根据毛果杨与毛白杨之间的高度同源性,以毛果杨的APX基因启动子序列为模板设计引物,以毛白杨的DNA为模板,克隆得到毛白杨中的三个APX基因启动子序列,长度分别为950bp、1405bp、1234bp。2.对APX基因酶学特性的研究：使用已经构建好的pET30a-(+)-PpAPX的原核表达载体,利用1mM IPTG进行原核诱导表达。采用“镍离子层析柱一步法”纯化得到APX基因(同源基因位于毛果杨染色体LG-ⅡScaffold-57)的原核表达的重组蛋白,并利用双倒数作图法分别求得这两个重组蛋白的两个底物对应的米氏常数Km,最大反应速度Vm,转换数Kcat,并测得其最适pH值。另两个APX基因(同源基因都位于毛果杨染色体LG-V上)在原核表达过程中,形成了大量包涵体,采用尿素洗涤、溶解包涵体、蛋白复性和镍离子层析柱法相结合的方法得到高纯度的重组蛋白。3.APX基因的实时定量分析：运用实时定量PCR方法,分析了APX2基因(位于染色体Scaffold-57上)在7-8年生毛白杨不同组织部位的表达差异。发现该基因在毛白杨的老叶叶肉中的相对表达量最多,其次是老叶叶脉,在形成层的相对表达量最低。