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本文研究建立了一种针对重组CHO细胞的无血清培养基SFMC,经过对有血清贴壁生长的CHO细胞的适应性培养,使其在SFMC培养基中悬浮批培养的最大细胞密度达到了4×106 cells/ml,HBsAg表达量达到1.5 mg/L。
葡萄糖是重组CHO细胞在无血清悬浮培养过程中最重要的营养物质,细胞的生长受葡萄糖限制,葡萄糖耗尽后,细胞即停止生长,并逐渐死亡。细胞对pH的适应性较好,在pH6.3~7.8范围内细胞均可以正常生长,但是随着pH的升高,其代谢过程中乳酸对葡萄糖的得率增加。小于4.5 mmol/L的氨浓度和小于450 mosm/kg的渗透压都不会对细胞的生长造成明显影响。
在生物反应器培养中,根据代谢研究数据建立了重组CHO细胞的营养模型,并根据具体的培养工艺设计了控制模型。以此为依据的葡萄糖限制流加培养和限制性流加灌注培养均取得了较好的结果。在流加培养过程中,培养了190h,最大活细胞密度达到5.1×106 cells/ml,HBsAg产量达到2.3 mg/L。在限制性流加灌注培养过程中,培养470 h,最大活细胞密度达到了1.38×107cells/ml,最大HBsAg生产能力为0.7mg/(L·d)。
在摇瓶培养中,在0h加入1%以上的DMSO对细胞的生长有明显的抑制作用,但提高了HBsAg的产量,其中以1.5%的添加量效果最好,在分批培养中HBsAg产量可达到3.2 mg/L。流加培养过程中,当细胞密度达到1×106cells/ml时加入1.5%DMSO,培养190 h,最大活细胞密度为2.9×106 cells/ml,最大HBsAg产量达到了3.6 mg/L。对数生长末期32 h加入DMSO对细胞生长和HBsAg生产影响不大。