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研究目的和意义:抑郁症是心境障碍的一种临床表现,主要表现为各种原因引起的显著而持久的心境低落,具有高发病率、高复发率、高致残率和高致死率的特点。目前,抑郁症的发病原因和过程仍未被完全阐明,药物和治疗方法也有待进一步优化,而有效、稳定的动物模型可以为抑郁症的研究提供有力的保障。本团队前期实验证实,通过多次向左侧海马CA1区注射多巴胺D1受体阻滞剂SCH23390,可以建立一种以脑内神经递质失衡为特征的抑郁症大鼠模型。此模型所表现出的抑郁症状可以被阳性药物逆转。此种方法虽然已经被证明是一种有效、稳定、操作简便且可量化的抑郁症动物模型,但是造模过程中需要安装微量注射套管,这不但延长了造模时间,而且后续无法利用该模型开展水迷宫、强迫游泳等实验,限制了该模型的应用。所以本实验意欲取消套管安装过程,对造模过程进行进一步优化。研究方法:1.改良模型的有效性评价:依据糖水消耗实验,将健康大鼠随机分为正常对照组、改良模型组和原模型组。改良模型组直接向海马CA1区注射多巴胺D1受体阻滞剂SCH23390,浓度为8 μ g/μ L,体积为1 u L/d,隔1天注射1次,共注射4次;原模型组安装套管,通过套管向海马CA1区注射SCH23390,浓度为2 μ g/μ L,体积为1 u L/d,每注射2天休整1天,共注射6次;正常对照组不做任何处理。观察造模后1、2周内各组大鼠的体重变化情况和行为学(糖水消耗实验、旷场实验)表现,比较改良模型组与原模型组所造成的抑郁效果。ELISA法比较改良模型组、正常对照组大鼠血清中炎症因子(IL-1β、TNF-α)含量,观察改良造模方法是否会引起大鼠炎症反应。2.改良模型的病理特征分析:依据糖水消耗实验,将健康大鼠随机分为正常对照组和改良模型组。2周后,检测左、右侧海马及大脑皮层内相关指标:HPLC-MS法检测5-HT、DA、NE、5-HIAA 含量;ELISA 法检测 AchE 含量;Western-blot 法检测 5-HT1 A、5-HT2A含量,分析改良模型的病理特征。3.改良模型的效度评价:依据糖水消耗实验,将健康大鼠随机分为空白对照组、改良模型组和逍遥丸组。造模后,逍遥丸组给予逍遥丸灌胃(1.5g/kg/d),共给药2周;而空白对照组、改良模型组大鼠均给予等体积生理盐水灌胃。两周后,进行体重测量、糖水消耗实验和旷场实验。最后一次行为学测试后取材,检测双侧海马及大脑皮层内相关指标:HPLC-MS法检测5-HT、NE、5-HIAA含量;Western-blot法检测5-HT2A含量,评价逍遥丸对改良模型的影响。结果:1.改良模型的有效性评价结果:造模后第7天,与正常对照组相比,改良模型组、原模型组体重变化率、糖水偏好率、旷场实验垂直得分极显著降低(p<0.01),旷场试验水平得分改良模型组极显著降低(p<0.01),原模型组显著降低(p<0.05),表明改良造模方法与原造模方法一样,可以造成大鼠的抑郁状态;与原模型组相比,改良模型组体重变化率、糖水偏好率、旷场实验水平得分、旷场实验垂直得分均无统计学差异(p>0.05),表明改良造模方法与原造模方法所造成的抑郁程度相同。造模后第14天,与正常对照组相比,改良模型组、原模型组体重变化率、旷场实验水平得分、旷场实验垂直得分极显著降低(p<0.01),糖水偏好率显著降低(p<0.05);与原模型组相比,改良模型组体重变化率、糖水偏好率、旷场实验水平得分、旷场实验垂直得分均无统计学差异(p>0.05),表明造模2周,改良造模方法仍能维持大鼠的抑郁状态,且所造成的抑郁程度相同与原造模方法相同。而ELISA结果显示,同正常对照组相比,改良模型组大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量无统计学差异(p>0.05),表明改良的造模方法不会引起大鼠炎症反应。2.改良模型的病理特征分析结果:造模两周后,与正常对照组相比,改良模型组左侧海马5-HT、NE含量极显著升高(p<0.01),5-HIAA极显著降低(p<0.01),DA含量呈降低趋势、AchE呈升高趋势(p>0.05),5-HT1A未有明显变化(p>0.05),5-HT2A含量极显著降低(p<0.0l);右侧海马5-HT、NE含量极显著升高(p<0.01)、5-HIAA极显著降低(p<0.01),DA含量呈降低趋势、AchE呈升高趋势(p>0.05),5-HT1A未有明显变化(p>0.05),5-HT2A含量极显著降低(p<0.01)。大脑皮层5-HT、NE、AchE含量呈升高趋势,5-HIAA、DA含量呈降低趋势,5-HT1A含量无明显变化,5-HT2A含量呈降低趋势(p>0.05)。说明改良模型基本符合抑郁症模型的病理特征。3.改良模型的效度评价结果:经过两周的逍遥丸治疗,与改良模型组相比,逍遥丸组体重变化率极显著升高(p<0.01),糖水偏好率、旷场试验水平得分、垂直得分呈升高趋势(p>0.05)。左侧海马5-HIAA含量显著升高(p<0.05),5-HT、NE含量呈降低趋势,5-HT2A含量呈升高趋势(p>0.05)。右侧海马5-HIAM含量显著升高(p<0.05),5-HT、NE含量呈降低趋势、5-HT2A含量呈升高趋势(p>0.05)。说明逍遥丸对缓解改良模型大鼠的抑郁症状有一定作用。结论及意义:本研究通过对本团队前期建立的以脑内神经递质失衡为特征的抑郁症大鼠模型进行改良,取消套管安装程序,并将给药剂量和次数调整为8μg/μL/d,隔1天注射1次,共注射4次。经过有效性、炎症因子含量、病理特征及预测效度分析,证明改良的造模方法有效,较原造模方法缩短了造模天数,可以用于水迷宫、强迫游泳实验的进行,扩大了使用范围,且不会引起炎症反应,是一种理想的抑郁症大鼠模型。