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研究目的:1.自制普通阳离子脂质体。2.将普通阳离子脂质体与apo E(载脂蛋白E)偶联,构建一种新型的具有与肝(癌)细胞结合特异性的转染载体,即apo E修饰脂质体。3.分别检测自制普通阳离子脂质体和apo E修饰脂质体对人正常肝细胞株HL-7702和人肝癌细胞株HepG2、HuH-7和Li-7的转染特异性和转染效率。4.探索不同apo E含量的apo E修饰脂质体对三种肝癌细胞的转染效率,并探索apo E修饰脂质体的储备时间是否对细胞转染有影响。5.检测自制普通阳离子脂质体与apoE修饰脂质体对HepG2细胞是否具有细胞毒性作用。研究方法:1.乙醇注入法和挤压法联合制备普通阳离子脂质体。2.将载脂蛋白E与普通阳离子脂质体偶联,制备apoE修饰脂质体。3.将普通阳离子脂质体和apoE修饰脂质体分别与pGenesil-1质粒混匀、孵育,确定最佳的转染比例。4.分别使用普通阳离子脂质体和apo E修饰脂质体转染细胞,荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白EGFP的表达以检测apoE修饰脂质体对HL-7702正常肝细胞、HepG2、HuH-7和Li-7肝癌细胞的转染特异性。5.制备不同apoE含量的apo E修饰脂质体,分别转染HepG2、HuH-7肝癌细胞,荧光显微镜和流式细胞术筛选转染率最高的apoE修饰脂质体,确定脂质体中apoE的最佳负载量。6.储备时间不同的apo E修饰脂质体分别转染HepG2肝癌细胞,荧光显微镜和流式细胞术检测其转染效率,统计学分析apoE修饰脂质体的储备时间是否对细胞转染有影响。7.琼脂糖凝胶电泳分析apoe修饰脂质体-质粒dna复合物与普通阳离子脂质体-质粒dna复合物在dnaseⅠ溶液中的稳定性。8.脂质体对hepg2肝癌细胞的毒性实验,通过mtt法研究普通阳离子脂质体和apoe修饰脂质体对hepg2的细胞毒性作用。研究结果:1.普通阳离子脂质体制备完成后,使用pgenesil-1质粒进行包裹实验,确定普通阳离子脂质体:pgenesil-1质粒的最佳结合比例为0.5μl:2.5μg。2.apoe修饰脂质体制备完成后,使用pgenesil-1质粒进行包裹实验,确定apoe修饰脂质体:pgenesil-1质粒的最佳结合比例为2μl:2.5μg。3.两种脂质体介导pgenesil-1质粒转染三种肝癌细胞、正常肝细胞和其他肿瘤细胞,通过荧光显微镜观察,证实apoe修饰脂质体对三种肝癌细胞和正常肝细胞具有结合特异性。4.流式细胞术结果表明,当apoe负载量为6.6μg/ml时,转染率最高,差异具有统计学意义(p<0.05)。5.流式细胞术证实,随着apoe修饰脂质体储备时间的增长,其对hepg2肝癌细胞的转染率下降,差异具有统计学意义(p<0.05)。6.mtt实验未观察到两种脂质体对hepg2细胞有明显的毒性作用(p>0.05)。研究结论:1.apoe修饰脂质体较普通阳离子脂质体具有更高的转染效率,apoe修饰脂质体中apoe的负载量不同,细胞转染效率也不同。2.随着apoe修饰脂质体储备时间的增长,apoe修饰脂质体的转染效率呈下降趋势。3.未观察到apoe修饰脂质体和普通阳离子脂质体对hepg2细胞的明显毒性作用。