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目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG132对Hela细胞凋亡及其caspase-3表达的影响。方法:采用对数生长期人宫颈癌Hela细胞进行实验。实验组予以不同浓度MG132干预,对照组则不加MG132。1.倒置显微镜观察对照组及终浓度为10μmol/L MG132处理组Hela细胞生长情况。2.丫啶橙联合溴化乙锭双染,荧光显微镜观察对照组及终浓度为10μmol/L MG132处理组Hela细胞培养48h后细胞形态和染色变化。3.电镜观察对照组及终浓度为10μmol/L MG132处理组Hela细胞培养48h后的超微结构。4.对照组及终浓度为10μmol/L MG132处理组Hela细胞培养48h后,抽提Hela细胞DNA,对DNA裂解片段凝胶电泳。5.对照组及终浓度为2.5、5、10、20μmol/L MG132作用组Hela细胞培养48h后,PI单染流式细胞仪分析Hela细胞凋亡百分率。对照组及终浓度为10μmol/L MG132作用组Hela细胞培养24、48、72h后检测细胞凋亡率和细胞周期变化。6.免疫细胞化学SABC法检测对照组及不同浓度MG132作用组Hela细胞48h后,图像分析软件(IPP)量化测量细胞中caspase-3蛋白的表达情况,用各浓度组细胞的平均积分光密度(IOD)表示。结果:1.倒置显微镜下观察到对照组Hela细胞伸展良好,呈梭形及多角形,细胞数量多,细胞接触紧密。MG132处理后大多数Hela细胞缩小变圆,细胞膜出泡,部分细胞脱壁,细胞间间隙增宽,凋亡细胞明显增多。2.丫啶橙(A0)联合溴化乙锭(EB)双染显示:对照组Hela细胞呈绿色均匀荧光,细胞圆形均匀。实验组可见部分Hela细胞核染色质凝聚、固缩或断裂,呈致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色颗粒,部分带弱桔红荧光,呈凋亡细胞表现,偶见强橘红色死细胞。3.透射电镜观察:实验组部分出现细胞凋亡的典型形态学特征:细胞体积变小,细胞膜皱缩,胞核固缩,染色质固化、边集化,密度增高,帽状附于核膜,可见细胞凋亡小体。4.DNA裂解片段凝胶电泳分析:对照组DNA条带集中在样品孔附近,实验组出现明显“阶梯状”条带。5.流式细胞仪检测显示:对照组及经终浓度为2.5、5、10、20μmol/L MG132处理Hela细胞48h后,Hela细胞的凋亡率逐渐升高,分别为0.96%,7.47%,12.15%,19.35%,28.94%,任意两组间比较差异显著(P<0.001)。对照组及经10μmol/L MG132处理Hela细胞24、48、72h后,与对照组相比,G2/M期Hela细胞所占比例改变,以48h所占比例最高,而凋亡率随MG132作用时间延长而升高。6.经不同浓度MG132处理后Hela细胞中caspase-3蛋白的表达呈阳性,各浓度组单个细胞平均积分光密度(IOD)值经统计软件处理显示任意两组间蛋白表达水平差异显著(P<0.001)。结论:1.MG132能够诱导Hela细胞凋亡,呈剂量-时间依赖性。MG132使Hela细胞阻滞在G2/M期。2.MG132作用后Hela细胞caspase-3蛋白表达上调,提示caspase-3参与了MG132诱导的Hela细胞凋亡。