构建基于酶催化反应的生物化学传感器

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酶是生物体内一种具有催化作用的生物大分子,其在维持生命体正常活动的过程中扮演着非常重要的角色,生物体内酶含量的失衡通常与诸多疾病的发生密切相关。因此,开发高灵敏度,特异性检测生物体内酶活性的方法将对相关疾病的早期诊断和后期指导治疗具有非常重要的意义。荧光分子探针是近年来发展的一种高效分析检测方法,其具有灵敏度高、选择性好、操作简单、生物侵害性小以及时空分辨高等优点。近年来,荧光分子探针被广泛应用于分析检测和生物成像等方面,极大推动了相关领域的发展。基于酶在生物体内所扮演的重要角色以及荧光分子探针在生物检测方面所具有的巨大优势,本论文中,我们尝试设计合成了三类不同的荧光生物化学传感器,分别实现了对亮氨酸氨基肽酶(LAP)和芳基硫酸酯酶(ARS)的跟踪检测。(1)设计合成了一种新型亮氨酸氨基肽酶激活的前药分子(CPT-p-Leu)。在LAP存在下,该酶催化裂解CPT-p-Leu分子结构中的酰胺键,并进一步发生分子内的1,6-消除反应,激活前药分子中的抗癌药物喜树碱(CPT),并实现体系荧光信号的显著增强。通过上述过程,前药分子CPT-p-Leu实现了特异性监测LAP活性的目的,并对相关癌细胞进行有效杀伤,达到诊疗一体化的目的,为癌症等相关疾病的研究提供参考。(2)以近红外荧光染料DCM-OH和香豆素染料为母体分别设计合成了两个对芳基硫酸酯酶(ARS)进行特异性识别的荧光生物化学传感器:DCM-S和Coumarin-S。在ARS存在的条件下,该生物化学传感器结构中的硫酸酯键能够特异性的被ARS催化裂解,并释放出荧光团母体,从而激活体系的荧光信号,达到特异性监测ARS的目的。(3)设计合成一种新型特异性检测生物体系中亮氨酸氨基肽酶(LAP)的荧光生物化学传感器:CHMC-N-Leu。通过LAP催化裂解生物化学传感器结构中的酰胺键,释放出自由胺基结构,自由胺基将进一步进攻分子体系中的酯键,并释放出荧光团母体CHMC,实现荧光信号的变化,达到特异性监测LAP的目的。
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