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钩端螺旋体(简称钩体)病是由问号钩体感染引起的自然疫源性人兽共患传染病,人类主要通过接触带菌动物尿液污染的水体、土壤而感染。因此钩体病也是洪涝时重点监控的传染病。严重者可导致Weil’s综合症。虽然钩体病的致病因素如:脂多糖、脂蛋白、肽聚糖、热休克蛋白及鞭毛蛋白等可能与致病性有关,但确切的致病机制至今未明。 钩端螺旋体属可分为问号钩体和双曲钩体,前者为致病菌,后者则为腐生型。钩体血清群、型众多,各群、型间交叉保护作用较弱或无,故目前国内外均采用当地流行的钩体血清群、型来制备多价钩体疫苗菌苗,但副作用较大,交叉免疫保护作用微弱。 近年我国科学家报道了问号钩体黄疸出血群赖型赖株的全基因序列,国外学者报告跨膜蛋白OmpL1、脂蛋白LipL32和LipL41是所有问号钩体外膜中主要的表面蛋白。我们曾证实我国流行的问号钩体参考标准株均含有编码上述外膜蛋白的ompL1、lipL32和lipL41基因,其重组表达产物具有良好的抗原性和免疫反应性。然而,OmpL1、LipL32和LipL41可能的抗原表位,及其诱导细胞分泌炎性细胞因子的作用未见报道。 本研究中,我们建立了Ni-NTA亲和层析法,并提取了不同基因型表达的重组目的蛋白(rOmpL1/1和rOmpL1/2、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2),以SDS-PAGE鉴定表达产物,采用多种预测服务器对表达产物分子的功能表位进行了分析,并以人脐静脉内皮细胞株EVC-304为效应细胞,检测了上述重组蛋白诱导细胞分泌炎性细胞因子的作用。