【摘 要】
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目的:1.研究结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫和体液免疫应答。2.评价结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠对结核分枝杆菌毒株攻击的免疫保护性。方法:1. BALB/c小鼠
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目的:1.研究结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫和体液免疫应答。2.评价结核分枝杆菌H37Ra免疫小鼠对结核分枝杆菌毒株攻击的免疫保护性。方法:1. BALB/c小鼠随机分为3组:H37Ra组、BCG组和NS组,分别用H37Ra、BCG和NS皮内注射,免疫后第6w,做小鼠PPD迟发型超敏反应实验。2.第8w处死部分小鼠,测定小鼠脏器重量指数;肺组织病理学检测。3.分离小鼠外周血血清,ELISA法测定血清特异性IgG抗体的水平。4.流式细胞分析仪检测小鼠脾淋巴细胞亚群的变化。5.取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4的产生水平;MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI)。6.免疫后第8w,用5×106CFU MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4w后处死小鼠,测定小鼠脏器重量指数。7.取稀释小鼠脾脏、肝脏和肺脏匀浆接种于改良罗氏培养基,培养21d后计数CFU。8.同时取肺组织做病理学检查。结果:1.H37Ra免疫小鼠后能诱导显著的迟发型超敏反应,以24h为最佳观测时间。2.免疫小鼠8w后,肝、肺、脾、肾脏器重量指数差异均无统计学意义;病理学检测发现H37Ra免疫小鼠后肺组织无明显改变。3.H37Ra免疫小鼠血清中抗PPD IgG抗体的水平显著升高。4.H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞的百分率为(41.63±1.68)%,显著高于NS对照组(38.44±1.87)%(P<0.05);H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫小鼠,但差异无统计学意义。各组间脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+T/CD8+T比值差异均无统计学意义(P>0.05)。5.脾淋巴细胞SI、IFN-γ和IL-4水平检测发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05);H37Ra免疫组略高于BCG免疫组。6.感染4w后H37Ra和BCG组小鼠肝、肺、脾、肾脏器重量指数较NS对照组均显著降低(P<0.05),但H37Ra和BCG组间小鼠各脏器重量指数均无显著性差异(P>0.05)。7.H37Ra组小鼠肺、脾、肝组织荷菌量与NS对照组比较分别下降0.954、1.228和0.883log10CFU,差异有显著性(P<0.05)。H37Ra组各脏器组织荷菌量与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05)。8.组织病理分析发现:H37Ra组小鼠肺泡腔有浆液性渗出,肺泡间隔增厚,局部有巨噬细胞浸润和肉芽肿形成。BCG组小鼠肺泡结构完整,巨噬细胞的浸润略增加,肺泡壁略增厚。而NS对照组病变严重而广泛,肺泡腔内有明显的出血性渗出液,大部分肺泡壁肿胀、增厚,肺泡结构被破坏。结论:1.H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫和体液免疫应答。2.H37Ra免疫小鼠后能够抵抗毒株H37Rv的攻击,但效果不及BCG。
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