【摘 要】
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为了探讨鹿茸的再生机制,本研究首先成功建立梅花鹿鹿茸软骨细胞体外短期培养方法,分析鹿茸软骨细胞体外培养特点。体外培养鹿茸干细胞,探讨了IGFⅠ对鹿茸干细胞的影响。根据
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为了探讨鹿茸的再生机制,本研究首先成功建立梅花鹿鹿茸软骨细胞体外短期培养方法,分析鹿茸软骨细胞体外培养特点。体外培养鹿茸干细胞,探讨了IGFⅠ对鹿茸干细胞的影响。根据牛、鼠、人、猪Collagen X(ColX)的保守序列设计引物,用分离培养的鹿茸肥大软骨细胞制作模板,通过RACE方法首次克隆、测定该目的基因,将基因登录GenBank获得的登录号为EF103187;同时将该基因序列构建到pEGFP-C1融合表达载体。根据目标基因构建针对性的短发夹RNA(shRNA)表达载体,用质粒表达的方式,获得了针对鹿茸软骨细胞ColX基因的小干扰RNA(siRNA),并将其共转染NIH-3T3细胞,检测siRNA对ColX的抑制效果,筛选有效siRNA,结果表明,不同组的shRNA较空载体对照组和无关对照组有效地抑制了ColX的表达。筛选得到对ColX具有高效抑制作用的shRNA重组表达质粒,为鹿茸软骨内成骨机理的研究奠定基础。
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