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目的:研究cofilin-1的表达情况与肺腺癌顺铂耐药的关系,探讨cofilin-1的高表达导致顺铂耐药的可能机制,找寻逆转顺铂耐药的作用靶点。方法:选用人肺腺癌A549细胞系及A549/DDP耐药细胞系,用一定浓度顺铂培养A549/DDP细胞,形成肺腺癌耐药模型。培养细胞至对数生长期(约80%),充分裂解细胞,提取细胞总蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,半干法转到PVDF膜上,用1%的BSA(TBST配制)封闭4-6小时,cofilin-1一抗冰箱孵育过夜(1:800稀释),TBS冲洗后辣根过氧化物酶标记的二抗37℃孵育3-4小时,TBS洗涤后ECL法显影,洗片,选用β-actin作为内参(1:10000稀释)。对重复三次得到的Western blot结果进行灰度值分析,以β-actin为内参对照,应用统计软件SPSS 13.0进行统计学分析,确定P<0.05为差异有显著意义。选择中南大学湘雅医院1999-2008年经病理证实的肺腺癌患者活检组织蜡块包埋标本,按照1979年WHO制定的实体肿瘤客观疗效评定标准,分为化疗敏感组(CR+PR)20例,化疗耐药组(PD)20例。入选标准:坚持以铂类为主的化疗方案治疗4周期以上,此间未接受过手术治疗,有完整的病历资料。活检标本常规石蜡切片(4μm),按SP免疫组化试剂盒说明完成cofilin-1蛋白的免疫组织化学检测,用PBS代替一抗作为阴性对照,以正常上皮组织阳性切片作为阳性对照。以细胞浆内和(或)细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。应用统计软件SPSS 13.0进行统计学分析,确定P<0.05为差异有显著意义。结果:采用Western blot成功检测到人肺腺癌A549细胞及A549/DDP细胞中cofilin-1蛋白的表达情况,并进行半定量分析。三次Western blot的条带均显示,A549/DDP细胞中cofilin-1蛋白含量明显多于A549细胞。分析所得蛋白条带灰度值,P<0.0005,两者差异具有统计学意义。利用免疫组织化学方法分析了cofilin-1蛋白在20例顺铂耐药肺腺癌患者活检组织标本及20例顺铂敏感肺腺癌患者活检组织标本中的表达水平。Cofilin-1蛋白阳性信号可定位于细胞膜、细胞浆及细胞核;cofilin-1蛋白在肺腺癌患者活检组织标本中的阳性表达率为100%,在耐药组弱阳性(+)1例,阳性(++)6例,强阳性(+++)13例;在敏感组弱阳性(+)4例,阳性(++)11例,强阳性(+++)5例;耐药组cofilin-1蛋白表达的阳性程度远高于敏感组,P<0.0005,两组表达差异具有统计学意义。结论:①顺铂耐药肺腺癌中cofilin-1蛋白呈高表达;②cofilin-1蛋白与肺腺癌顺铂耐药密切相关;③cofilin-1蛋白可能成为逆转顺铂耐药的作用靶点。