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目的:筛选具有广谱中和能力的血浆,为寻找诱导HIV-1感染者产生高水平和型别交叉广谱中和抗体的免疫原及交叉中和抗原表位的阐释提供前期基础,进而为研发适合我国HIV-1流行株的新型艾滋病疫苗提供科学依据。
方法:用带荧光素酶报告基因的HIV-1包膜假病毒与感染者血浆进行中和试验检测对141份新疆HIV-1慢性感染者的血浆中和能力。将携有HIV-1 B、C及AE重组亚型感染者env基因片段的质粒与包含荧光素酶报告基因的pSG3△env质粒共转染于293T细胞,培养48h后收获含单循环复制缺陷型假病毒的上清;测定假病毒TCID50进行定量。将100TCID50假病毒分别与血浆混合孵育1h后,加入TZM-bl细胞继续培养,48h后裂解细胞,用荧光发光仪测量其发光强度并计算出中和抗体的中和百分数,通过分析筛选出具有广谱中和能力的血浆。
结果:①共制备HIV-1B、C及AE重组亚型包膜假病毒11株;②141份HIV-1慢性感染者血浆与11株假病毒(包括4株B亚型、4株C亚型、及3株AE亚型假病毒)的中和试验结果显示,有20份血浆能与8株(B、C亚型)假病毒中和,中和百分数均大于50%,其中11份又能与至少1株AE亚型假病毒中和,中和百分数在50%以上。
结论:初步筛选出11份有广泛中和作用的HIV-1感染者血浆,既能与B、C亚型假病毒中和又能与AE亚型假病毒中和。为后期筛选广谱中和抗体以及诱生交叉中和抗体的抗原提供前期基础。