研究背景和目的： 急性心肌梗死(AcuteMyocardialInfarction，AMI)是在冠状动脉病变的基础上，发生冠状动脉急性闭塞，血流中断或减少，引起严重而持久的缺血性心肌坏死。临床表现呈突发性，剧烈而持久的胸骨后疼痛，特征性心电图进行性改变及血清心肌坏死标记物(心肌酶、肌钙蛋白和肌红蛋白等)增高，可发生心律失常、心力衰竭、休克等合并症，常危及生命，为冠心病的严重类型。AMI相关研究愈来愈受重视。不稳定动脉粥样硬化斑块突然破裂导致血小板激活和血栓形成是AMI的主要病理基础，脂质蓄积、大量炎症细胞浸润、纤维帽变薄、胶原蛋白和平滑肌细胞损耗等均可促使动脉粥样硬化血栓形成(atherothrombosis)，而白细胞募集至受损动脉内皮是动脉粥样硬化斑块形成的先决条件。AMI是个人遗传背景、行为方式和各种环境因素相互作用所引起的复杂性状遗传性疾病，其发生发展过程包括4条各具特征但又相互作用的生物学路径：脂蛋白代谢异常、内皮完整性受损、炎症和血栓形成，除血脂异常、吸烟、糖尿病、高血压、腹型肥胖、缺少运动、少食蔬菜水果和肉食过多、精神紧张和大量饮酒等危险因素外，某些基因和蛋白也与AMI的发生发展相关，研究风险标记基因结合传统危险因素有助于进行AMI患者危险分层评估。有研究表明，缝隙连接蛋白37(Cx37)基因可能与心肌梗死的发生、发展相关，但由于Cx37C1019T多态性在不同种族、人群和环境中存在差异，不同研究结论之间可出现相反结论或矛盾之处。 缝隙连接蛋白(connexins，Cx)编码的蛋白是缝隙连接成份之一，缝隙连接由大量的、为小分子量材料提供扩散路径的胞间通道构成。 单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种DNA序列多态性，是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90％以上，主要表现为单个核苷酸的转换和颠换，为第三代DNA遗传标记，其在药物或疾病易感性、表型差异、遗传性疾病诊断以及个体化疾病预防等领域具重要应用价值。Cx37C1019T多态性可致C-末端尾部发生脯氨酸-丝氨酸替换(Pro319Ser)，表达Pro319CX37蛋白的细胞的粘附能力弱于表达Ser319CX37的细胞，表明T等位基因个体细胞粘附能力强于C等位基因个体，致单核细胞在动脉粥样硬化区域易于募集，促进AMI早期脂质条纹的形成，从而可能增加罹患AMI的风险。据此，我们对Cx37基因单核苷酸多态性位点进行筛选，探讨Cx37多态性在健康人群和急性心肌梗死人群中的分布，并对Cx37基因dbSNPrs1764391位点与急性心肌梗死的关系进行研究，探讨Cx37基因C1019T(rs1764391)基因型与血清心肌梗死标记物变化的关系。 方法： 1.Cx37基因多态性位点筛选 提取23例健康人和20例急性心肌梗死患者外周血单个核细胞DNA，设计一对引物，扩增Cx37基因(3067bp)，另外设计7条Walking引物，最后拼接成全序列。用DNA测序法分析PCR产物，筛选急性心肌梗死患者Cx37基因单核苷酸多态性位点，为进一步研究Cx37SNPs与急性心肌梗死的关系提供依据。 2.Cx37基因C1019T多态性位点基因型在正常人群中的分布 提取147例健康人外周血单个核细胞DNA，自行设计引物，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerasechainreation-restrictionfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)技术分析Cx37基因C1019T多态性位点基因型，探讨Cx37基因C1019T(rs1764391)位点在健康人群中的分布。 3.Cx37基因dbSNPrs1764391位点与急性心肌梗死的关系 提取136例急性心肌梗死患者外周血单个核细胞DNA，自行设计引物，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerasechainreation-restrictjonfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)技术分析Cx37基因C1019T多态性位点基因型，结合147例健康人Cx37基因C1019T(rs1764391)基因型分析结果，研究Cx37基因dbSNPrs1764391位点与急性心肌梗死的关系。 4.Cx37基因C1019T基因型与血清心肌梗死标记物变化的关系 以分离胶真空管采集研究对象外周血，分离血清与血细胞，日立7170全自动生化分析仪(日本)检测血脂系列和心功能指标，德灵DimensionRXL全自动化学分析系统检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)。所有血清学项目均按试剂说明书设置分析参数，定标通过后进行质控品分析，确保质控值符合要求后检测上述血清学指标，研究Cx37基因C1019T基因型与血清心肌梗死标记物的关系。 结果： 1.通过DNA测序分析，在Cx37基因共筛选出15个SNPs，频率约为0.49％，其中rs1764391多态性在健康人和急性心肌梗死人群中存在显著差异，4个SNPs为新发现的潜在多态性位点，其分别位于E2编码区、3’-UTR调控区和非编码区。 2.广东汉族健康人群Cx371019位点CC、TT和CT基因型分布分别为65.31％，6.12％和28.57％，其中男性的CC、TT和CT基因型频率分别为64.05％、6.74％和29.21％，女性的CC、TT和CT基因型频率分别为67.24％、5.17％和27.59％，x2检验结果表明基因型观察值与预期值之间无显著差异(x2=2.139，0.10.05)。 3.AMⅠ组T等位基因频率显著高于对照组，假定CC型OR值为1.0时，则TT基因型OR为3.911，CT基因型OR为2.057，结果表明T等位基因个体AMI患病风险显著高于C等位基因个体，TT基因型和CT基因型个体罹患AMI风险高于CC基因型个体。在男性人群中病例组T等位基因频率高于对照组，T等位基因个体患AMI风险是C等位基因2.060倍，TT和CT基因型AMI患病风险分别是CC基因型的3.314倍和2.090倍。在女性人群中T等位基因个体AMI患病风险是C等位基因个体2.455倍，假定CC基因型患AMI风险为1.0，则TT基因型OR为5.353，而女性人群AMⅠ组和正常对照组间CT基因型分布无显著差异。 4.AMⅠ组和对照组血清学指标比较组间血清学指标cTnI(心肌肌钙蛋白I)、CK-MB(肌酸激酶同工酶MB)、HsCRP(超敏C-反应蛋白)、CRP(C-反应蛋白)和LDL-CH(低密度脂蛋白胆固醇)差异有统计学意义(p<0.05)，而TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)、HDL-CH(高密度脂蛋白胆固醇)、ApoAl(载脂蛋白Al)、ApoB(载脂蛋白B)和Lp(a)[脂蛋白(a)]组间无显著差异(p>0.05)。 结论： 1.采用小样本对健康人群和急性心肌梗死患者进行测序可有效筛选出候选SNP。初步证实急性心肌梗死与Cx37基因C1019T(rs1764391)多态性相关，为后续应用SNPs遗传标记预测急性心肌梗死患病风险提供了依据。 2.不同国家和地区人群CX371019T多态性等位基因频率分布存在差异，此差异可能与不同地区、不同种族人群具不同的CAD和MI发病率相关。明确不同地区、不同种族人群Cx37C1019T多态性位点基因型频率和等位基因频率分布特征可为研究Cx37C1019T多态性与CAD和MI的关系提供进一步的依据。 3.Cx371019位点T等位基因携带者AMI患病风险显著高于C等位基因个体，TT基因型个体罹患AMI风险高于CC基因型个体，Cx37基因C1019T多态性可能是广东汉族人群AMI患病危险因素之一。 4.血清LDL-CH水平在病例组和对照组间差异有统计学意义(p<0.05)，且在不同基因型之间也存在差异(p<0.05)，TT和CT基因型LDL-CH水平显著高于CC基因型(p分别为0.031和0.022)，TT和CT基因型间则无显著差异(p值为0.530)，表明T等位基因携带者LDL-CH水平高于C等位基因携带者。 主要创新点： 1.对中国人群Cx37基因全长3067bp进行SNP位点筛选，共筛选出15个SNP位点，其中筛选出4个未在NCBISNP数据库登录的潜在SNP位点，目前国内无此类报道导。 2.探讨广东汉族人群Cx37基因C1019T多态性分布，并发现与广东汉族人群AMI患病风险增高相关。 3.首次发现Cx37基因C1019T多态性基因型不同则血清LDL-CH水平相异(p=0.044)。