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肺结核曾经令人谈虎色变,其病原菌就是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)。现在虽然有卡介苗预防接种,有药物进行治疗,但由于耐药菌株不断出现,肺结核病卷土重来并非耸人听闻。因此,继续研究结核分枝杆菌的生物学特性以开发新药,对预防和治疗这种顽症很必要。细胞壁是分枝杆菌赖以生存的结构基础。分枝菌酸、聚阿拉伯糖半乳糖及肽聚糖组成了其核心结构。其中衔接双糖(L-鼠李糖-D-N-乙酰葡萄糖胺)作为重要结构把聚半乳糖共价连接到肽聚糖大分子上。由于人体内不存在鼠李糖分子,所以衔接双糖中尤其是鼠李糖可作为抗结核药物研发的理想靶标。dTDP-L-鼠李糖是鼠李糖残基的唯一供体。结核分枝杆菌基因组中rmlA-D四种基因编码了RmlA-D四种酶,参与了由底物1-磷酸葡萄糖合成dTDP-L-鼠李糖的过程。所以RmlA-D四种酶的任一种酶都可作为开发抗结核新药的靶标。结核分枝杆菌dTDP-4-酮基-6-脱氧-L-鼠李糖还原酶即RmlD是dTDP-L-鼠李糖合成途径中的第四种酶。本论文通过建立分子伴侣和蛋白质共表达RmlD体系同时改变诱导温度而优化rmlD基因在BL21(DE3)大肠杆菌中的高表达,以获得大量的可溶性RmlD蛋白质。用Ni-NTA亲和层析纯化RmlD蛋白质,然后测定RmlD蛋白质的酶活性。为进一步完善RmlD酶活性测定方法,研究纯RmlD酶的酶促反应动力学特性和建立筛选RmlD酶抑制剂方法提供物质基础。本论文获得以下结果:1. RmlD蛋白质在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达将本实验室构建的pET16b-Tb rmlD表达质粒转化到BL21(DE3)