背景与目的：A型核纤层蛋白前体(prelamin A)的结合蛋白很可能在细胞衰老中发挥重要的作用。人KIN17是本课题组通过酵母双杂交技术筛选出的一个prelaminA的候选结合蛋白。KIN17主要与DNA的复制与细胞的增殖有关，并参与了DNA损伤反应与修复功能。目前研究发现，细胞的衰老与DNA损伤修复功能障碍及基因组不稳定性增加有关。所以我们推测，KIN17很可能在细胞衰老中发挥一定的作用。本研究通过确证KIN17与prelamin A的相互作用，检测KIN17在衰老组织细胞与正常组织细胞中的表达水平与定位情况，利用基因转染技术，在细胞中高表达KIN17蛋白，探讨KIN17对细胞增殖与衰老状况的影响。 方法：用酵母一对一回复双杂交实验证实人KIN17与prelamin A及laminA是否存在蛋白间相互作用。构建人KIN17原核表达重组质粒，诱导表达并纯化His-KIN17融合蛋白；诱导表达GST-laminA蛋白，为GST-Pull down方法在体外确证KIN17与laminA相互作用做好准备。免疫组化SP法检测36例各年龄段人正常皮肤组织标本中KIN17的表达与定位情况；RT-PCR检测衰老细胞与正常对照中KIN17 mRNA的表达；运用Western blot技术检测衰老细胞与正常对照中KIN17蛋白的表达；构建pIRES2-EGFP-KIN17真核表达质粒，用脂质体转染法转染人胚胎肾HEK-293细胞。MTT方法检测转染前后细胞生长增殖状况，细胞计数法绘制细胞生长曲线，计算倍增时间，检测细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶活性。 结果：用酵母一对一回复双杂交实验证实了人KIN17与prelamin A及laminA都存在蛋白之间相互作用。成功构建了人KIN17原核表达重组质粒，诱导表达并纯化了His-KIN17融合蛋白。诱导表达GST-lamin A蛋白，为GST-Pull downassay奠定了基础。免疫组化结果显示KIN17主要在皮肤组织中生长增殖比较活跃的组织细胞中高表达。随着年龄的增长，表皮中表达KIN17的阳性细胞比例逐渐下降。而且随年龄的增长，KIN17的表达与定位有从细胞浆向细胞核中靠拢的趋势。在25岁以前的青少年阶段，人皮肤组织表皮细胞中的KIN17主要定位于细胞浆中，26-45岁之间的中青年阶段主要集中在细胞核周边部位的细胞浆中，46以后的中老年阶段主要定位于细胞核中。衰老细胞中KIN17mRNA水平高于正常对照，但蛋白表达水平与正常对照没有明显差异。将pIRES2-EGFP-KIN1重组质粒转染HEK-293细胞后，MTT方法检测表明转染后细胞生长增殖受到抑制，抑制率是27.9％，倍增时间为54h，而未转染细胞的倍增时间为38h(P<0.05)。转染pIRES2-EGFP-KIN1重组质粒后，HEK-293细胞中β-半乳糖苷酶活性较转染pIRES2-EGFP空载对照的活性轻度增加(P<0.05)。 结论：酵母一对一回复双杂交实验证实了人KIN17是prelamin A及lamin A的一个新的候选结合蛋白。KIN17主要在人皮肤组织中生长增殖比较活跃的组织细胞中高表达。随着年龄的增长，表皮中表达KIN17的阳性细胞比例逐渐下降。而且随年龄的增长，KIN17的表达与定位有从细胞浆向细胞核中靠拢的趋势。衰老细胞中KIN17 mRNA水平高于正常对照，但蛋白表达水平与正常对照没有明显差异。在细胞中过表达KIN17能抑制细胞的生长增殖，诱导细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶活性轻度增加。本研究进一步证实了KIN17与细胞生长增殖密切相关；人KIN17蛋白很可能在细胞衰老中发挥一定的作用。