黄连属植物遗传多样性分析和铁皮石斛原球茎细胞学观察

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本实验以峨眉黄连在内的11种黄连属植物为样本,以RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)为技术手段,对黄连属种间亲缘关系、遗传多样性以及造成基因组差异的原因进行了研究,尤其对峨眉黄连种内四个居群的多态性位点进行了基因流和遗传距离的分析。实验结果如下:1.利用RAPD对11种黄连属植物的基因组进行扩增,82条随机引物共扩增出771条带,每个引物平均扩增9.5条带,多态性位点688个,占总扩增带数的89.37%。说明黄连属种间具有较为丰富的遗传多态性。对于4个生境采集的峨眉黄连,共扩增出510条带,其中198个多态性位点,平均多态率为38.8%。与种间遗传水平相比,峨眉黄连种内遗传多样性有限。2.根据RAPD结果进行的UPGMA聚类分析结果与传统形态学分类结果一致。味连与其他三种黄连的遗传距离最远,单独分为一支。其次是两个生境的三角叶黄连聚为一支,而且这两个样本之间的相似性极高。在相似性系数大于0.84的水平上,草连和峨眉黄连分化为两支。其中,黄湾的样本和三道河的双翼型峨眉黄连聚为一支,白崖、人棚子沟的样本和三道河的凤尾型样本聚为一支。3.通过POPGENE对四个生境的峨眉黄连的基因流进行了研究,结果显示居群水平上的多态率为26%,shannon信息指数0.1852,遗传分化指数(Gst)为0.3680,基因流(Nm)为0.2912。这表明发生在峨眉黄连基因组内的多数变异存在于居群内,居群间缺少基因交流。相对较低的基因流可能是造成居群间遗传分化的主要原因,但是我们也不能排除遗传漂变的因素。对于峨眉黄连的基因组的遗传结构,生长环境仍然起到主导作用。对于唯一存在分类不一致的样本5(凤尾型,三道河),我们推测不同表型的个体之间存在微小的遗传差异,但这种差异不足以影响整个居群的进化。以铁皮石斛原球茎为实验对象,通过植物组织石蜡切片的技术手段,对铁皮石斛从球形胚到萌发过程中体胚中顶部的形态发生过程进行了研究。实验结果发现,由愈伤组织培养15天左右,原球茎部分区域表面形成不均匀毛状突起。随着组织的发育,部分突起分化成芽,芽周围的表面组织向内凹陷,形成杯状。通过组织切片的观察,我们进一步证实了铁皮石斛原球茎发育过程中球形胚的存在,也证明了大部分原球茎的发生起源于球茎内部的胚性细胞团。
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