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背景与目的三阴性乳腺癌（Triple-negative breast cancer,TNBC）是不表达雌激素受体（Estrogen receptor,ER）、孕激素受体（Progesterone receptor,PR）和不伴有人表皮生长因子受体 2（Human epidermal growth factor receptor 2,HER2）过表达或基因扩增的一类乳腺癌亚型,其具有侵袭性强的生物学特性,且由于缺乏靶向治疗和内分泌治疗靶点,其预后往往较差。近年来,免疫检查点抑制剂被广泛应用于恶性肿瘤的治疗。T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域（V-domain immunoglobulin suppressor of T-cell activation,VISTA）是一个新兴的免疫检查点,己被证实在免疫治疗后的前列腺癌和恶性黑色素瘤中表达升高,推测其与免疫治疗耐受有关,或可成为免疫治疗新靶点。但是,VISTA在TNBC肿瘤微环境中的表达模式、与免疫细胞的作用关系及对预后的影响尚不明确。本课题研究目的包括以下三方面:（1）分析VISTA在TNBC肿瘤细胞和免疫细胞的表达情况,分析其与临床病理特征及预后的关系。（2）分析VISTA在TNBC肿瘤微环境中,与CD3、CD4、CD8、CD19阳性的肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor infiltrating lymphocytes,TILs）的相关性,建立基于VISTA的免疫分型。（3）利用TCGA等数据库从基因层面分析VISTA表达与TNBC临床病理特征及预后的关系,与CD3、CD4、CD8、CD19的表达相关性,分析TNBC微环境中28种免疫细胞富集水平,探索VISTA表达水平对免疫细胞富集种类和程度的影响,分析VISTA与免疫细胞富集的相关性,探索VISTA与免疫细胞的作用关系和对抗肿瘤免疫反应的影响。方法:（1）建立包含254例未经治疗且信息完整的Ⅰ-Ⅲ期TNBC队列,利用免疫组化染色方法,检测VISTA在肿瘤细胞和免疫细胞的表达情况,根据阳性细胞百分比中位数作为分界值,将队列分为VISTA在肿瘤/免疫细胞高/低表达组,分析其与临床病理特征及预后的关系。（2）在上述队列分析TILs密度,检测CD3、CD4、CD8、CD19表达情况,分析CD3、CD4、CD8、CD19阳性TILs及TILs密度与VISTA在肿瘤细胞及免疫细胞表达的相关性,建立基于VISTA的免疫分型,并验证其对预后的预测意义。（3）利用 TCGA、cBioportal、GEPIA、UALCAN 等交互数据库,获取VISTA在乳腺癌与正常乳腺组织、不同亚型乳腺癌中的表达差异;从TCGA数据库筛选建立包含139例未经治疗且信息完整的Ⅰ-Ⅲ期TNBC队列,根据VISTA mRNA表达水平中位数作为分界值,将队列分为VISTA表达高低两组,分析其与临床病理特征及预后的关系;分析VISTA mRNA与CD3、CD4、CD8、CD19 mRNA相关性:利用GSEA富集分析获取肿瘤微环境中28种免疫细胞富集水平,比较VISTA mRNA高表达和低表达两组之间免疫细胞的富集种类和程度的差异,分析VISTA mRNA与不同类型免疫细胞的富集程度的相关性,探索VISTA与免疫细胞的作用关系和对抗肿瘤免疫反应的影响。结果:（1）根据筛选标准,最终有254例我院手术的Ⅰ-Ⅲ期TNBC被纳入。研究结果显示,在TNBC中,VISTA主要在免疫细胞表达,在肿瘤细胞表达较少;VISTA在免疫细胞高表达与淋巴结阴性（P<0.001）、相对早的肿瘤分期（Ⅰ和Ⅱ期）（P=0.001）相关;VISTA在免疫细胞高表达相较于低表达组,具有显著高的 5 年无病生存率（Disease-free survival,DFS）（79.0%VS 64.6%,P=0.011）和5 年总生存率（Overall survival,OS）（90.0%VS 72.0%,P<0.001）,VISTA在免疫细胞高表达是OS的独立保护因素（风险比（Hazard ratio,HR）=0.436,95%置信区间（Confidence interval,CI）=0.228-0.831,P=0.012）;在T1-2N0亚组中,VISTA在免疫细胞高表达生存优势显著,相较于低表达组,其具有显著高的5年DFS（86.8%VS 73.1%,P=0.038）和5年OS（95.6%VS 82.7%,P=0.022）,VISTA 在免疫细胞高表达是 DFS（HR=0.281,95%CI=0.093-0.848,P=0.024）和 OS（HR=0.462,95%CI=0.218-0.979,P=0.044）的独立保护因素。（2）在TNBC中,VISTA在免疫细胞高表达与CD3+TILs、CD4+TILs、CD8+TILs、CD19+TILs 密度增加均显著相关（P=0.009,P<0.001,P=0.021,P<0.001）,与CD4+TILs关系最为密切呈现中等强度正相关（R=0.423,P<0.001）。根据VISTA在免疫细胞表达高低和CD4+TILs密度高低,对TNBC微环境进行免疫分型,分为 VISTAH/CD4H、VISTAH/CD4L、VISTAL/CD4H、VISTAL/CD4L四型,其中VISTAH/CD4H组5年OS显著高于另3组（VISTAH/CD4H VS VISTAH/CD4L VS VISTAL/CD4H VS VISTAL/CD4L:91.5%VS 89.2%VS 77.3%VS 68.7%,P=0.002）,即双高组相较于其它三组生存获益显著。（3）根据筛选标准,最终有139例TCGA数据库Ⅰ-Ⅲ期TNBC被纳入。研究结果显示,VISTA mRNA水平与年龄、月经状态、肿瘤分期、淋巴结分期、总分期、乳房及腋窝手术方式、是否放疗及化疗等无显著关系,对总生存无影响。VISTA mRNA 与 CD3、CD4、CD8 和 CD19 mRNA 均呈正相关（均P<0.001）,且与 CD4 mRNA 呈强正相关（R=0.764）;VISTA mRNA 高表达组相较于低表达组,有正向抗肿瘤免疫作用的1型辅助性T细胞（Type 1 Helper T cell,Th1）、活化的树突状细胞（Dentriccells,DCs）、辅助记忆性CD8+T细胞富集程度显著高,VISTA与Th1（R=0.751）、活化的DC（R=0.642）等呈强正相关,推测VISTA在TNBC微环境中刺激产生CD4+Th1细胞从而发挥正向抗肿瘤免疫作用。结论:（1）在TNBC中,VISTA在免疫细胞中高表达是TNBC预后的独立保护因素。（2）建立基于VISTA与CD4的TNBC微环境免疫分型,对预测预后有显著意义,且优于VISTA单一指标。（3）在TNBC中,从蛋白层面和基因层面均可见VISTA与CD4表达有显著相关性,在细胞富集层面可见VISTA与CD4+Th1细胞关系密切,推测VISTA通过刺激产生CD4+Th1细胞从而发挥正向抗肿瘤免疫作用。