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近年来发展起来的基因芯片技术具有高通量、并行性的特点,可以快速、准确的检测大量基因,在分析疾病相关基因方面具有极大的优势。基因芯片技术可分析样本的基因表达特征,如肿瘤和正常组织的差别、转移灶与原发灶的差别以及不同病理类型的差别,寻找发生明显变化的基因和各种表达差异基因之间的关系,利于研究肿瘤的发生和进展机制,为指导治疗和预后监测提供线索。
尽管目前应用基因芯片技术筛查卵巢癌相关基因已有报道,但一般病例数很少,所得结果的代表性不强;或仅限于“发现”差异表达的基因,但对于基因的阐述和认识不足,缺乏一种综合性的分析;并且大多数研究应用的是市售的芯片,相对于肿瘤来讲针对性不强。针对这种情况,通过查阅文献,从国外购进特异性的克隆后自行构建了肿瘤相关的cDNA芯片,应用这种芯片筛选了14例卵巢癌患者的16例标本,将发生半数以上差异性表达的基因列表分析,并将部分基因按功能分类阐述其变化趋势,同时重点分析了1例颗粒细胞瘤和1例未成熟畸胎瘤和2例卵巢上皮癌癌旁组织的差异表达基因。期望得到有关卵巢癌发生和进展的分子生物学基础,为疾病的靶向治疗和预后监测等提供理论参考。
目的:
应用实验室自主构建的肿瘤相关cDNA芯片筛查卵巢癌相关基因,探讨卵巢癌发生和进展的分子机制,联系不同病理类型进行分析,为临床治疗和预后监测提供参考。
方法:
1.自行构建包含2560个点阵的肿瘤相关cDNA芯片。
2.标本18份,正常卵巢2例,卵巢浆液性乳头状癌12例加癌旁组织2例,颗粒细胞瘤1例,未成熟畸胎瘤1例。提取肿瘤组织与正常卵巢组织总RNA,反转录后标记为cDNA探针,与芯片杂交后经扫描获取图象,应用Quantarray3.0软件分析,得到基因表达的数据资料。应用半定量RT-PCR方法对cDNA芯片检测到的某些差异表达基因进行验证。
结果:
1.自制的包含2560个基因点阵的cDNA芯片,实验证实标本与芯片杂交结果良好,扫描图象信号清晰,背景信噪低,重复性好。
2.16例标本,发生半数以上差异表达的基因101个,上调基因35个,下调基因66个。将基因按照功能分为:(1)代谢相关酶类基因;(2)癌基因和抑癌基因;(3)黏附分子基因;(4)蛋白酶及其抑制剂基因;(5)生长因子及其受体基因;(6)凋亡及增殖相关基因;(7)热休克蛋白;(8)细胞周期蛋白相关基因。分别汇总阐述。在1例卵巢颗粒细胞瘤中,特异性上调的基因包括角蛋白17、胰岛素样生长因子、S100钙结合蛋白A4、IL24、G蛋白、自嗜基因、锌指蛋白以及3个EST(表达序列标签);在1例未成熟畸胎瘤中,层粘连蛋白和一种普遍存在的微管蛋白α的基因的表达明显降低;卵巢上皮性癌癌旁组织2例中,特异性上调基因包括nm23-H8、类肝素酶、血影蛋白等。
3.用半定量RT-PCR验证了MMP9基因的表达特征与芯片检测结果一致。
结论:
1.cDNA芯片技术可以快速、系统、准确地揭示基因的表达特征,为研究卵巢癌的发生和进展相关基因提供了良好工具。
2.通过研究正常卵巢和肿瘤之间、不同病理类型肿瘤之间、癌与癌旁组织的基因表达差异,为下一步建立基因预后表达谱提供了重要参考。