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目的:研制用于筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)的改良显色平板并对其性能进行评价;分析本院ICU患者肠道中CRE的定植情况及其相关危险因素,并对阳性菌株的耐药性、耐药机制及同源性进行研究。为本院CRE感染的防控及指导临床合理用药提供帮助。方法:用临床标本分离的49株CRE菌株及24株非CRE菌株对实验室自建的三种分别含亚胺培南(2μg/ml)、美罗培南(2μg/ml)、厄他培南(1μg/ml)的改良显色平板的性能进行评价;选择性能最优的改良显色平板用于后续研究;收集我院ICU患者的粪便标本共191份,用于比较美国CDC推荐方案、CHROMagar KPC显色培养基、含厄他培南纸片的麦康凯平板以及厄他培南改良显色平板的筛查性能;用厄他培南改良显色平板对我院2018年3月至2018年8月期间入住ICU患者的粪便标本进行CRE的主动筛查;阳性菌株分别以MALDI-TOF MS及Vitek 2Compact全自动药敏检测系统进行鉴定和常规药敏检测;采用mCIM试验进行碳青霉烯酶表型鉴定,PCR方法扩增常见的碳青霉烯酶耐药基因;通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株之间的同源性;同时,收集患者的临床资料,用Logistic回归分析统计与CRE定植相关的危险因素。结果:以临床分离株对改良显色平板进行评价,发现亚胺培南改良显色平板的敏感度与特异度分别为83.7%(41/49)、100.0%(24/24);美罗培南改良显色平板的敏感度与特异度分别为87.8%(43/49)、100.0%(24/24);厄他培南改良显色平板的敏感度与特异度分别为93.9%(46/49)、95.8%(23/24);三者之间敏感度与特异度的差异无统计学意义(P﹥0.05)。厄他培南改良显色平板ROC曲线下的面积为0.949,亚胺培南改良显色平板为0.918,美罗培南改良显色平板为0.939。以粪便标本对四种CRE筛查方法进行评价,发现美国CDC推荐方案的敏感度与特异度分别为80.3%(49/61)、79.2%(103/130),CHROMagar KPC显色培养基的敏感度与特异度分别为93.4%(57/61)、97.7%(127/130),含厄他培南纸片的麦康凯平板的敏感度与特异度分别为80.3%(49/61)、96.9%(126/130),厄他培南改良显色平板的敏感度与特异度分别为98.4%(60/61)、98.5%(128/130)。厄他培南改良显色平板的敏感度优于美国CDC推荐方案和含厄他培南纸片的麦康凯平板(P<0.05);CHROMagar KPC显色培养基的敏感度优于美国CDC推荐方案和含厄他培南纸片的麦康凯平板(P<0.05);厄他培南改良显色平板与CHROMagar KPC显色培养基之间敏感度的差异无统计学意义(P﹥0.05);含厄他培南纸片的麦康凯平板与美国CDC推荐方案之间的敏感度差异无统计学意义(P﹥0.05)。厄他培南改良显色平板的特异度优于美国CDC推荐方案(P<0.05),但其与CHROMagar KPC显色培养基及含厄他培南纸片的麦康凯平板之间的差异无统计学意义(P﹥0.05);CHROMagar KPC显色培养基的特异度优于美国CDC推荐方案(P<0.05),但与含厄他培南纸片的麦康凯平板之间的差异无统计学意义(P﹥0.05);含厄他培南纸片的麦康凯平板的特异度优于美国CDC推荐方案(P<0.05)。美国CDC推荐方案的ROC曲线下面积为0.798,CHROMagar KPC显色培养基的ROC曲线下面积为0.956,含厄他培南纸片的麦康凯平板的ROC曲线下面积为0.886;厄他培南改良显色平板的ROC曲线下面积为0.984。2018年3月至2018年8月期间,我院ICU患者肠道中CRE的总体定植率为40.4%(82/203)。82名患者共筛查出84株CRE,其中肺炎克雷伯菌78株(92.9%),大肠埃希菌4株(4.9%)、阴沟肠杆菌1株(1.2%)、弗劳地枸橼酸杆菌1株(1.2%);84株CRE对多数抗生素均表现出较高的耐药性,除庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星及氨曲南外,其余抗生素的耐药率均高于90%;mCIM表型确证试验的阳性率为89.3%(75/84);PCR扩增及测序分析结果发现84株CRE中有76株携带碳青霉烯酶耐药基因,68株单产KPC-2,7株单产NDM-1,1株同时产KPC-2、NDM-1以及IMP-4;PFGE分析结果显示,按照85%的相似性将菌株划分为同一个型谱,可将78株肺炎克雷伯菌划分为A~H共8个谱型,其中A型有51株(51/78,65.4%),B型有12株(12/78,15.4%),C型有6株(6/78,7.7%),D型有3株(3/78,3.8%),E型有2株(2/78,2.6%),F型有2株(2/78,2.6%),G型(1/78,1.3%)和H型(1/78,1.3%)各占1株;Logistic回归分析的结果表明侵入性操作(OR:3.282;95%CI:1.159-9.291)、脑血管疾病(OR:2.521;95%CI:1.257-5.056)以及肺部疾病(OR:2.007;95%CI:1.074-3.750)是CRE定植的独立危险因素。结论:厄他培南改良显色平板不仅具有较高的敏感度与特异度,同时还具有筛查周期短、价格低廉、简便快捷等优点,更适用于临床微生物实验室的推广应用;我院ICU患者肠道中CRE的定植率较高,且CRE菌株以肺炎克雷伯菌为主,主要耐药机制为产KPC-2,这些菌株表现出对多种抗生素耐药;侵入性操作、脑血管疾病以及肺部疾病是肠道CRE定植的重要危险因素;此外,本院ICU中的肺炎克雷伯菌存在同一克隆株传播流行的可能,临床医生与院感防控部门后续应进行严格监测,做好隔离与消毒,以防止耐药株的进一步扩散。