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目的研究共聚物-1(Copolymer-1, Cop-1)免疫或致敏淋巴细胞移植在神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6- tetrahydropyridine,MPTP)所致C57BL/6J小鼠急、慢性模型中保护黑质多巴胺能神经元的作用。材料与方法以慢性或急性注射MPTP制备雄性C57BL/6J小鼠(体重20~25g)帕金森病(Parkinson’s disease, PD)模型。1.慢性模型:动物按随机表法分为MPTP模型组、MPTP/ Cop-1后免疫组、MPTP/ Cop-1立即免疫组、MPTP/ Cop-1提前免疫组和正常对照组。MPTP模型组动物仅接受MPTP注射,MPTP/ Cop-1后免疫组在MPTP连续注射7天后接受Cop-1免疫;MPTP/ Cop-1立即免疫组在第一次MPTP注射后立即接受Cop-1免疫; MPTP/ Cop-1提前免疫组在接受Cop-1免疫7后开始注射MPTP,正常对照组动物仅接受生理盐水注射。除对照组外其余四组均接受5mg/kg剂量的MPTP腹腔注射,每天一次,持续24天。MPTP连续注射完成后7天处死动物,取脑、脾。HE染色观察脾病理学变化;脑切片酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase, TH)免疫组化定量分析黑质DA神经元数;高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)分析纹状体多巴胺(Dopamine, DA)及其代谢产物含量。观察Cop-1直接免疫能否对DA能神经元起到保护作用。2.急性模型:雄性C57BL/6J小鼠随机分为Cop-1免疫组、Cop-1致敏淋巴细胞移植组、MPTP模型组和正常对照组。Cop-1免疫组在注射MPTP之前10天接受Cop-1抗原免疫;Cop-1致敏淋巴细胞移植组动物在MPTP末次注射后,立即接受Cop-1致敏淋巴细胞移植;MPTP模型组动物仅接受MPTP注射,正常对照组动物仅接受生理盐水注射。除正常对照组外,各组动物均接受4次MPTP(18mg/kg)腹膜腔内注射,每次间隔2h。200μg的Cop-1(与完全弗氏佐剂等量混合充分乳化后)处理的雌性C57BL/6J作为移植细胞的供体,进行Cop-1致敏淋巴细胞的分离培养、鉴定、标记和细胞计数后,按照5×10~7个Cop-1致敏淋巴细胞尾静脉移植,MPTP末次注射后7天处死动物,取脑。TH免疫组化及体视学方法定量分析黑质DA能神经元数。比较不同处理组动物黑质DA能神经元数的差异,探讨Cop-1免疫或致敏淋巴细胞对模型动物DA能神经元可能的保护作用及两种方法保护作用的差异。结果1.慢性模型:与正常对照组相比,MPTP模型组、MPTP/ Cop-1后免疫组、MPTP/ Cop-1立即免疫组、MPTP/ Cop-1提前免疫组动物脾脏外观均出现色泽灰暗,然而HE染色显示脾结构未见明显破坏。黑质DA神经元定量分析显示,与正常对照组比较,持续低剂量MPTP注射使模型对照组黑质DA神经元减少了65.13%,MPTP/ Cop-1后免疫组、MPTP/ Cop-1立即免疫组、MPTP/ Cop-1提前免疫组黑质DA神经元分别减少了31.68%、27.55%和28.29%,Cop-1处理各组DA神经元数明显高于模型对照组(P <0.01)。HPLC法测定纹状体内多巴胺及其代谢产物含量结果显示,与正常对照组相比,模型组DA及其代谢产物含量明显减少。MPTP/ Cop-1后免疫组、MPTP/ Cop-1立即免疫组、MPTP/ Cop-1提前免疫组类似,但均明显高于模型组(P <0.01)。2.急性模型:黑质DA神经元定量分析显示,与正常对照组比较,MPTP注射使模型对照组黑质DA神经元减少了58.02%,而Cop-1免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植组黑质DA神经元分别只减少了20.49%和24.88%,DA神经元数明显高于模型对照组(P <0.01)。结论1.在C57BL/6J小鼠慢性MPTP模型中,持续低剂量MPTP注射对小鼠的脾脏无明显损伤,Cop-1直接免疫可有效对抗MPTP毒性,保护黑质-纹状体系统的DA神经元。2.在C57BL/6J小鼠急性模型,Cop-1提前免疫和Cop-1致敏淋巴细胞移植都可有效对抗MPTP毒性,保护黑质DA神经元。两者的保护作用相当。