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核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)是细胞内的重要成分,研究表明核糖核酸及其酶解物对免疫系统正常功能、肠道生长发育、肝组织功能及脂代谢都有重要影响。我国可提供的核酸资源较单一,工业上主要以废啤酒酵母作为原料提取RNA,但获取原料困难,提取率较低,不能满足市场需要。豆渣中的核酸以核蛋白的形式存在,其含量也不亚于酵母核酸,且豆渣价格低廉,来源丰富,是天然优质的核酸资源。但目前尚未见有关豆渣RNA提取及功能的相关研究。故本论文以豆渣为原料,对RNA的提取、纯化及酶解工艺进行了优化,进—步以不同剂量豆渣RNA及酶解物为对象,研究二者对小鼠的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能的影响,比较二者免疫调节作用的差异,具体结果如下:
(1)通过单因素试验和响应面分析试验对豆渣RNA提取工艺进行优化,结果表明:提取温度为92℃,提取时间为70min,液料比为10∶1,提取液pH5.4为最适提取条件,在此条件下,RNA提取率为0.215%。
(2)比较了无水乙-NaCl,异丙醇-NaCl和LiCl3种不同RNA沉淀剂的纯化效果,结果表明异丙醇-NaCl沉淀剂的纯化效果最好,最终RNA得率为0.48%且OD260/OD280为1.83。
(3)以酶解物的核苷酸含量和转化率为检测指标,通过单因素试验和正交试验对牛胰RNA酶酶解豆渣RNA的工艺进行优化,得到最佳酶解条件为:酶浓度10%,温度65℃,pH值4.5,时间1h,底物浓度为2%,在此条件下得到的核苷酸含量为2.2mg/mL,转化率达到62.52%。
(4)研究了豆渣RNA和酶解物对小鼠的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能的影响,并比较了两者的差异。结果表明,与对照组相比,RNA组和酶解物组均显著增加脾脏指数,其中酶解物高剂量组脾脏指数极显著高于其他各剂量组;同时RNA组和酶解物组的胸腺指数也有所增加,但与对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。在细胞免疫方面,与对照组相比,RNA组和酶解物组均能显著提高小鼠脾淋巴细胞增殖能力。其中,酶解物高剂量组与对照组相比,差异极显著(P<0.01),与RNA组相比,差异显著(P<0.05);在迟发性变态反应试验中,RNA和酶解物各剂量组DT反应与对照组比较未见显著性差异P>0.05)。在体液免疫方面,与对照组相比,RNA和酶解物各剂量组均能提高小鼠抗体生成细胞数。其中,RNA组与对照组相比无显著性差异,酶解物组与对照组相比差异显著(P<0.05),且酶解物高剂量组与对照组相比差异极显著(P<0.01);在血清溶血试验中,与对照组相比,RNA组和酶解物组均显著增加血清溶血素水平(P<0.05)。其中,酶解物高剂量组血清溶血素水平极显著高于对照组(P<0.05)。而酶解物组与RNA组血清溶血素水平无显著性差异(P>0.05)。在非特异性免疫方面,与对照组相比,RNA组和酶解物组均未显著高巨噬细胞的碳廓清指数。以上结果表明,豆渣RNA及其酶解物均可以通过促进细胞免疫和体液免疫来提高小鼠的免疫机能,其中酶解物组的免疫效果优于RNA组。