UBE2H在结肠癌中的表达及临床意义

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目的 检测结肠癌中泛素结合酶 E2 H(Ubiquitin conjugating enzyme E2 H,UBE2H)的表达水平,探索其表达水平与患者临床病理特征以及术前外周血肿瘤指标、炎症指标之间的关系,分析UBE2H对结肠癌患者预后的影响。方法 结肠上皮细胞株CCD-841-CoN为对照组,5种结肠癌细胞株LoVo、RKO、Caco-2、SW480、HCT-116为实验组,UBE2H mRNA相对表达量使用实时荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测并采用 2-ΔΔCT法比较差异;UBE2H蛋白表达量由蛋白印迹试验(Western Blot)检测并运用Image J软件处理数据。免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色法检测结肠癌组织芯片中UBE2H表达情况,Wilcoxon秩和检验分析结肠癌组织与癌旁正常组织中UBE2H的表达差异,χ2检验探讨UBE2H与患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存分析及log-rank检验探索UBE2H表达水平对结肠癌患者总生存期(Overall survival,OS)的影响,Cox 比例风险模型分析影响结肠癌患者预后的危险因素。收集81例结肠癌患者手术标本及术前外周血指标,IHC检测组织中UBE2H的表达水平,χ2检验分析结肠癌组织中UBE2H的表达与术前外周血指标的关联性。数据库探索UBE2H的分布与功能。结果 qRT-PCR显示,5种结肠癌细胞株中UBE2H mRNA相对表达量均显著低于结肠上皮细胞株,差异具有统计学意义(对照组CCD-841-CoN:1±0.066;实验组SW480:0.00008±0.00002,P<0.0001;LoVo:0.00014±0.00009,P<0.0001;HCT-116:0.0002±0.0001,P<0.0001;RKO:0.00006±0.00002,P<0.0001;Caco-2:0.00004±0.00001,P<0.0001)。Western Blot显示,结肠癌细胞株中UBE2H的蛋白表达水平低于结肠上皮细胞株,差异具有统计学意义(LoVo:P<0.05;HCT-116:P<0.05;RKO:P<0.01;Caco-2:P<0.01;SW480:P<0.01)。IHC显示,相对于癌旁正常组织,UBE2H低表达于结肠癌组织,差异具有统计学意义(P=0.0004)。结肠癌组织中UBE2H表达水平与是否发生远处转移(χ2=5.511,P=0.019)有关,与外周血癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)水平(χ2=4.504,P=0.034)、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平(χ2=4.227,P=0.040)相关,未发现不同UBE2H表达水平在性别、年龄、肿瘤直径、病理分级、临床分期、糖类抗原(Carbohydrate antigen,CA)19-9(CA19-9)、CA125、CA724、中性粒细胞百分比(Percentage of neutrophils,N%)、血红蛋白(Hemoglobin,Hb)、白细胞(White blood cell,WBC)、红细胞(Red blood cell,RBC)以及血小板(Platelet,PLT)之间的统计学意义。Kaplan-Meier生存分析表明UBE2H低表达的结肠癌患者OS更短(P=0.00013)。Cox 风险比例模型显示,UBE2H 低表达(HR=0.261,95%CI:0.125-0.545,P=0.0003),病理 Ⅲ 级(HR=2.751,95%CI:1.291-5.866,P=0.009),临床 Ⅲ~Ⅳ 期(HR=4.016,95%CI:2.078-7.936,P<0.0001)与预后不良有关;结肠癌组织中 UBE2H 表达水平(HR=0.437,95%CI:0.180-1.060,P=0.049)和临床分期(HR=2.353,95%CI:1.244-4.451,P=0.008)是影响患者预后的独立危险因素。数据库分析显示,组织中UBE2H的表达水平高于外周血,并且相比于上皮细胞及纤维细胞,CD4+、CD8+T细胞和B细胞中UBE2H表达水平更高。UBE2H与细胞蛋白复合物分解、线粒体ATP合成耦合电子转运以及氧化还原酶活性等有关,并参与氧化磷酸化、细胞周期和DNA复制。结论 结肠癌中UBE2H低表达,结肠癌组织中UBE2H表达水平与术前外周血CEA和CRP水平相关,且UBE2H低表达的结肠癌患者预后更差,UBE2H表达水平是影响患者预后的独立危险因素。
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