目的随着对肾脏纤维化发生的分子机制逐渐深入,TGF-β₁在肾脏纤维化发生过程中的核心地位已经确立,采用多种手段阻断TGF-β₁信号转导通路可以有效预防肾脏纤维化、缓解肾脏纤维化进程。SARA是TGF-β₁的促纤维化作用通路中重要下游分子Smad2和Smad3的结合蛋白,其羧基末端的第665-750aa的Smad结合作用域（SBD）与Smad2和Smad3结合可抑制Smad2和Smad3的磷酸化,抑制Smad2和Smad3与Smad4的结合,从而抑制纤维化的发生。本项目根据以上理论和蛋白转导技术的研究进展,利用基因工程的方法在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,其既可高效进入细胞又可阻断smad2、smad3与smad4结合,阻断TGF-β₁信号转导通路,进而有效缓解肾脏纤维化进程。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,重组质粒转化大肠杆菌M15感受态,IPTG诱导表达后,经Ni²⁺-NTA亲和层析纯化获得目的蛋白,采用免疫印迹、蛋白质N端测序对融合蛋白进行了鉴定。结果成功构建了重组质粒pQE-30-PTD-SARA,经酶切鉴定与预期结果相符合,测序结果也表明插入结果正确。获得了纯化的融合PTD-SARA蛋白,其纯度＞90%。结论已成功表达并纯化了PTD-SARA融合蛋白,为其功能的研究奠定了基础,为临床防治肾脏纤维化提供一个新的策略。