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目的:本研究以分子生物学、形态学等检测技术,观察真武汤对肾阳虚型慢性肾衰模型大鼠肾组织AQP1及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响,旨在从分子水平探讨真武汤治疗慢性肾衰水液代谢平衡紊乱的药理作用机制,并为肾阳虚证“气化不利”的病理生理学机制提供实验依据。材料与方法:1.动物造模及给药:健康雄性Wistar大鼠30只,重量为220±20(g),由辽宁中医药大学实验动物中心提供,适应性饲养3天。随机按体重分为对照组、模型组及真武汤组,每组10只。采用腺嘌呤灌胃法建立肾阳虚慢性肾衰大鼠模型。从实验第1d起,模型组及真武汤组大鼠每日上午按10ml/kg/d腺嘌呤灌胃,对照组只进行灌胃刺激,共21天。造模2周后,从造模的第3周开始,模型组及真武汤组大鼠每日上午灌服腺嘌呤的同时,开始每日下午分别灌服生理盐水(按10ml/kg/d)和真武汤水煎液(按10ml/kg/d),连续21天。2.实验过程中观察各组大鼠的一般状态改变;观察平均体重变化;在动物取材前1d,将大鼠至代谢笼留取大鼠24h尿液,测量24h尿量、尿比重变化。3.取材及指标检测:大鼠给予腹腔注射20%氨基甲酸乙酯(5ml/kg)进行腹腔麻醉后,腹主动脉取血2m1,用于检测血Scr、BUN;摘取一侧肾脏组织,进行病理形态学分析和免疫组化方法检测组织AQP1、TNF-α表达,结果在IPP图像分析系统下对阳性表达部位进行分析;取另一侧肾脏,用于Western blot方法测定大鼠肾组织AQP1蛋白表达,利用图像分析技术对其表达水平进行对比。4.统计学处理:计量资料用x±SD表示,采用SPSS13.0统计学软件进行ANOVA(完全随机设计的单因素方差分析)统计方法处理,P<0.05为有显著性差异。结果:1.真武汤对肾阳虚肾衰模型大鼠肾功能影响与对照组比较,模型组大鼠出现畏寒肢冷、活动减少、食量减少、体重下降;尿量明显增加,尿比重下降,血Scr、BUN含量显著增高(P<0.05)。肾组织HE染色光镜下观察可见,肾小球充血,囊腔扩大,间质大量炎细胞浸润、纤维组织增生,肾小管代偿性扩张。真武汤组大鼠摄食较好、被毛较光泽、活动力较强、反应灵敏,体重均有不同程度增加,血Scr及BUN含量下降、尿量减少、尿比重增加(P<0.05)、肾组织光镜观察可见病理损伤明显减轻。2.真武汤对肾阳虚肾衰模型大鼠肾组织AQPl表达变化影响免疫组化方法检测表明:与对照组比较,模型组大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞膜和胞浆AQP1的表达明显减弱,灰度值明显降低(P<0.05);真武汤组大鼠近曲小管上皮细胞胞膜和胞浆AQP1的表达较模型组明显增强,灰度值明显高于模型组(P<0.05)。western blot方法检测显示:模型组大鼠AQPl表达下降,条带灰度值显著低于对照组(P<0.05);真武汤组大鼠肾脏AQP1蛋白表达增加,表现为条带宽,密度大,颜色深,灰度值显著高于模型组(P<0.05)。3.真武汤对肾阳虚肾衰模型大鼠肾组织中TNF-α表达等影响。大鼠肾脏组织对照组、模型组、真武汤组肾间质细胞胞膜和胞浆可见不同程度棕黄色颗粒;模型组大鼠肾间质细胞胞膜胞浆TNF-α的表达较对照组明显增加(P<0.05),真武汤组大鼠肾间质细胞胞膜胞浆TNF-α的表达明显较模型组减弱(P<0.05)。中医理论的肾主水,主要体现在依靠肾的气化作用“升清降浊”来维持机体的水液动态平衡,当肾阳虚气化功能减退时出现水液代谢障碍。本实验结果表明:肾脏的气化功能减退的原因之一,可能通过增加TNF-α表达,导致AQP1表达的下调,影响了肾脏的重吸收,真武汤能够改善肾脏的此项功能。结论:1.肾阳虚肾衰模型大鼠尿量增加,尿比重降低,血Scr及BUN水平增加,肾组织病理可见明显损伤,真武汤能够使其逆转。2.肾阳虚肾衰模型大鼠肾组织AQPl表达下调;真武汤治疗后可使AQP1表达上调。3.肾阳虚肾衰模型大鼠肾组织TNF-α表达上调;真武汤治疗后可使TNF-α表达下调。