HIF-1α、BCL-2在SD大鼠脑梗死急性期的表达及意义的探讨

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目的:观察SD大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)模型中脑梗死急性期HIF-1α和Bcl-2随时间变化的表达情况及相互关系,促进我们研究脑梗死形成后的一系列病理生理过程。方法:SD大鼠雌雄各半,体重250-320g。随机分成三组:A组(空白对照组4只),B组(手术组16只),C组(假手术对照组16只)。根据采血时间点不同又将B、C组分别分为0.5h、2h、3h、6h、12h、24h、3d、7d八个时段组。按照建立右侧大脑中动脉闭塞模型的改良线栓法,用改造过的鱼线栓塞大鼠右侧大脑中动脉,诱导动脉支配区缺血缺氧导致脑梗死形成。根据神经功能缺损评分筛选符合标准的大鼠,评分1-3分的大鼠纳入试验。以ELISA法测定HIF-1α与Bcl-2的在各组的OD值,并用标准品浓度绘制标准曲线,计算HIF-1α与Bcl-2的浓度。通过方差分析样本在不同时间段和不同处理组的HIF-1α与Bcl-2浓度变化情况。随机抽取手术组大鼠断头取脑行TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色判断颅内病灶是否形成,以此巩固神经功能缺损评分判断造模是否成功。结果:1)大鼠神经功能缺损评分:手术组评分:1.63±0.554分,空白组0分,假手术组评分0分,即手术组较其他两组有显著差异(P<0.05);2)HIF-1α的表达:不考虑时间因素,手术组与假手术组、空白组均有统计学差异(P<0.05);手术组与假手术组、空白组在0.5h、2h、3h、6h、12h这五个时间点上的表达有显著差异(P<0.05);手术组内每个时间点的两两比较发现:12h较6h以外的各时间均有显著差异,0.5h、2h、24h、3d、7d之间没有差显著异(P>0.05)。3)Bcl-2的表达:不考虑时间因素,手术组与假手术组、空白组均有统计学差异(P<0.05);手术组与假手术组相比6h、12h、24h两组间有统计学差异(P<0.05),手术组与空白组相比在2h、3h、6h、12h、24h、3d两组间存在统计学差异(P<0.05);手术组内8个时间点比较:6h、12h、24h与其他各点均有显著差异(P<0.05),6h、12h与24h有显著差异(P<0.05),其余的点之间都没有显著差异(P>0.05)。4)TTC染色用来判断造模成功后脑梗死的病灶情况,明确显示出了右侧大脑中动脉供血区,呈边界清晰的白色,与正常组织染色红色有较明显区别,结合神经功能缺损评分情况再次判断造模成功。结论:1)改良线栓法栓塞单侧大鼠大脑中动脉能成功诱导脑梗死形成并表现相应的神经功能缺损症状;2)手术组大鼠症状符合脑梗死表现,且神经功能缺损评分明显增加,而假手术组和空白对照组评分为0分,不同处理因素导致的症状差异有统计学意义,对手术组的大鼠脑组织进行TTC染色后清楚地显示出病灶范围后再次验证造模成功;3)手术干预后0.5小时检测到手术组HIF-1α的表达较空白组和假手术组有统计学意义,估计可能脑梗死后HIF-1α在此时开始表达,在12h的时候达到高峰,之后逐渐下降,24h回到对照组水平,提示HIF-1α在脑梗死超早期的病理生理过程中发挥作用;4)Bcl-2在脑梗塞6h后升高,12h达峰值后下降,到3d回到对照组水平,作为一种凋亡抑制基因,可能参与了脑梗死急性期的神经保护;5)在脑梗死后HIF-1α较Bcl-2早表达,都在12h表达达到峰值,之后都逐渐下降,有显著正相关关系。
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