【摘 要】
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孵化是生命体重要的生命过程,控制线虫的孵化也是防治南方根结线虫的重要方式之一,实验室前期筛选到一株促进南方根结线虫卵孵化的木霉菌株3838,并分离纯化得到活性化合物282和298,本论文主要进一步验证促孵化作用与活性化合物的对应关系,并对南方根结线虫卵的孵化相关基因做了一些初步研究。对木霉菌株3838的6个Ⅰ型PKS基因（PKS2.4,PKS22.1,PKS32.1,PKS32.3,PKS57.2
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孵化是生命体重要的生命过程,控制线虫的孵化也是防治南方根结线虫的重要方式之一,实验室前期筛选到一株促进南方根结线虫卵孵化的木霉菌株3838,并分离纯化得到活性化合物282和298,本论文主要进一步验证促孵化作用与活性化合物的对应关系,并对南方根结线虫卵的孵化相关基因做了一些初步研究。对木霉菌株3838的6个Ⅰ型PKS基因（PKS2.4,PKS22.1,PKS32.1,PKS32.3,PKS57.2,PKS101.3）进行敲除,除PKS2.4基因外,其余5个基因均获得了阳性敲除株。通过对敲除菌株发酵液乙酸乙酯萃取物的LCMS检测比较各菌株产生的代谢物,发现只有PKS32.1基因的敲除使菌株不产生促进卵块孵化的活性化合物;孵化活性实验和温室实验中,敲除菌株ΔPKS32.1的发酵液滤液对南方根结线虫卵块的孵化作用消失;该菌株对二龄幼虫具有弱的杀线虫能力;敲除菌株ΔPKS32.1与野生型菌株和对照相比孵化的二龄幼虫的寿命无明显差异;敲除菌株ΔPKS32.1与野生型和对照相比孵化的二龄幼虫对根的侵染能力降低;敲除菌株ΔPKS32.1能对卵粒进行侵染,与野生型菌株相比,敲除菌株ΔPKS32.1对卵粒的侵染率无显著差异。与野生型菌株一样,敲除菌株ΔPKS32.1只能对死线虫进行侵染,在整个侵染实验过程中,对卵壳不侵染,对活线虫也不侵染。其余四个基因（PKS22.1、PKS32.3、PKS57.2、PKS101.3）敲除后菌株依然能产生促进卵块孵化的活性化合物,4个敲除菌株ΔPKS22.1、ΔPKS32.3、ΔPKS57.2、ΔPKS101.3的发酵液滤液对南方根结线虫卵块的促孵化的作用不变,均具有弱的杀线虫活性。4个敲除菌株与野生型菌株和对照相比,孵出线虫的寿命均无显著性差异。敲除菌株ΔPKS22.1,ΔPKS57.2,ΔPKS101.3发酵液滤液处理的二龄幼虫对根的侵染能力降低。在对南方根结线虫的卵粒、卵壳和二龄幼虫的侵染实验中,4个敲除菌株均与野生型保持一致,均能侵染卵粒和死线虫,但不侵染卵壳和活线虫。通过对南方根结线虫孵化相关基因mpk-2和let-60的RNAi实验,mpk-2和let-60基因的相对表达量显著下降,干扰mpk-2和let-60基因后卵块的孵化效率明显降低,孵化的线虫的死亡率显著提高。本论文通过敲除木霉菌株3838的PKS32.1基因,木霉菌株3838产生促孵化物质的能力下降,促孵化作用也随之消失,进一步证实木霉菌株3838是通过产生活性代谢产物来促进南方根结线虫卵的孵化。同时锁定了南方根结线虫的mpk-2和let-60基因与卵的孵化相关。
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