论文部分内容阅读
研究背景与目的:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率均高居恶性肿瘤的第二位。胃癌的发生和发展是一个十分复杂的多步骤的过程,受抑癌基因的失活和癌基因的激活、表观遗传的改变等多种因素的影响。然而,潜在的分子机制仍然不清楚,现有的生物标志物不能有效地预测早期胃癌,因此深入探究胃癌的发生发展机制有助于寻找到特异性及敏感度更强的生物标志物。锌指同源框1(Zinc-fingers and homeoboxes protein 1;ZHX1)为新型转录抑制因子,广泛存在于各种组织细胞核内,发挥转录抑制作用。越来越多的证据表明,ZHX1可能参与调控肿瘤细胞的增殖、分化和转移等多个细胞生物学环节。然而,尚未有关于ZHX1在胃癌中的研究报道。本课题的目的是探索ZHX1在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞功能的影响。方法:采用免疫组化检测ZHX1蛋白在112对胃癌/配对癌旁正常组织中的表达情况,并结合患者临床病理资料进行统计分析;构建上调/下调ZHX1表达的稳转细胞株,研究ZHX1对胃癌细胞生物学功能的影响;采用CCK-8增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测ZHX1对胃癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测细胞迁移能力;裸鼠成瘤实验用于检测ZHX1在体内对胃癌细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测ZHX1对细胞凋亡和周期分布的影响;蛋白印迹分析用于检测凋亡和周期标志物的蛋白表达改变情况。结果:免疫组化结果显示,ZHX1蛋白主要集中表达在细胞核,且相较于癌旁正常组织,ZHX1蛋白在胃癌组织中表达水平显著降低。癌组织中ZHX1的低表达与不良临床病理特点相关:肿瘤体积较大(P=0.037)、分化较差(P=0.023)、浸润较深(P=0.016)和TNM分期较晚(P=0.008)。CCK-8增殖实验和软琼脂克隆形成实验都提示上调ZHX1表达能抑制胃癌细胞的增殖,下调ZHX1表达能促进胃癌细胞的增殖。裸鼠皮下成瘤实验再次证实ZHX1能抑制胃癌细胞体内成瘤能力。ZHX1通过下调抗凋亡蛋白Bcl2的表达,增加凋亡蛋白Bax及cleaved Caspase-3的表达诱导胃癌细胞凋亡。此外,ZHX1降低周期蛋白cyclin D1和cyclin E的表达,诱导胃癌细胞发生G1/S期细胞周期阻滞。结论:ZHX1蛋白在胃癌组织中低表达,并与不良病理指标相关。此外,ZHX1通过诱导胃癌细胞发生凋亡和G1/S期细胞周期阻滞抑制胃癌细胞的增殖。