论文部分内容阅读
目的:探讨结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法:1结核杆菌国际标准强毒株H37Rv(H37Rv)株、结核杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗(BCG)和卡介苗菌株Hsp16.3基因缺失突变株(△B CG)感染巨噬细胞RAW264.7细胞株,利用激光共聚焦显微镜技术鉴定感染RAW264.7巨噬细胞模型。2于巨噬细胞感染后1h、3h、6h、12h,用流式细胞技术检测各组感染巨噬细胞的凋亡率,利用Western-Blot技术比较研究巨噬细胞内Caspase-3、Bcl-2表达水平的变化。结果:1MTB的毒力不同凋亡率存在差异,感染BCG组的巨噬细胞凋亡率高于H37Rv组,感染△B CG组巨噬细胞凋亡率高于△H37Rv组。MTBHsp16.3基因缺失突变株感染巨噬细胞凋亡率高于正常菌株,感染△H37Rv组、△B CG组的巨噬细胞凋亡率高于H37Rv组和BCG组。2H37Rv、BCG、△H37Rv和△B CG感染巨噬细胞均能诱导表达Caspase-3和Bcl-2。随时间延长,其诱导感染巨噬细胞内Caspase-3的表达水平亦相应增加,至感染第12h时达到高峰,且BCG组感染巨噬细胞内Caspase-3的表达水平始终高于H37Rv组,△B CG组感染巨噬细胞内Caspase-3的表达水平始终高于△H37Rv组;H37Rv组与△H37Rv组、BCG组△BCG组感染巨噬细胞表达Caspase-3的水平没有差异。随时间延长,BCG组与△B CG组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平相应增加,至感染第12h时达到最高,而H37Rv组与△H37Rv组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平有所降低,至感染第12h时达到最低;BCG组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平始终高于△B CG组,且在3h、6h、12h差异具有统计学意义,H37Rv组感染巨噬细胞内Bcl-2的表达水平始终高于△H37Rv,且在1h、3h、6h差异具有统计学意义。结论:1感染巨噬细胞的凋亡率与菌株毒力强弱有关,毒力弱的MTB感染的巨噬细胞凋亡更显著。MTBHsp16.3可影响感染巨噬细胞凋亡率,敲除Hsp16.3基因的MTB比正常菌株诱导感染巨噬细胞凋亡水平高。2MTB感染巨噬细胞表达Caspase-3和Bcl-2水平与菌株毒力强弱有关。敲除Hsp16.3基因的MTB与正常菌株相比,诱导表达的Caspase-3和Bcl-2水平不同,可能与MTB能否产生Hsp16.3有关。3MTBHsp16.3可调控感染巨噬细胞的凋亡,而这种调控作用可能是通过促进Bcl-2蛋白的表达来实现的,与Caspase-3蛋白的表达无关。