葡萄籽原花青素对汞诱导的肉鸡肝肾毒性的保护作用研究

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汞在环境中广泛存在,以其毒性高和在环境中易迁移而被认为是主要的环境污染物之一。汞通过污染水源和饲料进入并蓄积于畜禽体内,对畜禽产生毒性作用。然而汞对肉鸡生产性能的影响、日粮中的汞在肉鸡组织中的残留规律,以及汞对肉鸡主要靶器官—肝脏和肾脏的毒性的剂量-效应关系及其机理缺乏系统的研究,通过添加植物提取物来拮抗汞引起的氧化损伤进而缓解汞对肉鸡的毒性的研究较少。因此,本研究拟揭示日粮中不同剂量的汞对肉鸡生长性能的影响、汞在肉鸡组织分布规律以及汞对肝肾的毒性作用,并探讨原花青素(Grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)缓解汞对肉鸡毒性的效果。试验选用240只1日龄罗斯308肉鸡,随机分为0 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg Hg和50 mg/kg Hg+450 mg/kg GSPE共6个处理组,每组5个重复,每个重复8只鸡,试验期为6周。在试验期间记录采食量和体增重,计算料肉比。在第3周末和第6周末分别进行屠宰,采集血液、肝脏、肾脏、羽毛、胸肌等组织样品,测定组织中Hg的残留,血清生化指标,肝、肾病理学检查,肝、肾抗氧化能力以及相关基因的表达。主要结果如下:1、日粮Hg对肉鸡生长性能的影响以及GSPE的缓解作用在第3周,与对照比相比,50 mg/kg的Hg显著降低了肉鸡ADFI、ADG(P<0.05),显著提高了F/G(P<0.05)。添加GSPE显著增加了肉鸡ADFI和ADG(P<0.05),降低了F/G(P<0.05)。在第6周,50 mg/kg的Hg显著降低了肉鸡的ADFI(P<0.05),而添加GSPE显著增加了肉鸡ADFI(P<0.05)。2、日粮Hg在肉鸡组织中的残留及GSPE对残留的影响在第3周,10 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg Hg显著增加肉鸡胸肌、肝脏、肾脏和羽毛中Hg含量(P<0.05),添加GSPE显著降低胸肌、肾脏和羽毛中Hg的含量(P<0.05)。在第6周,25 mg/kg和50 mg/kg Hg显著增加肉鸡胸肌中Hg的含量,10 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg Hg显著增加肉鸡肾脏中Hg的含量(P<0.05),肝脏和羽毛中Hg含量随着日粮Hg含量的增加而显著上升(P<0.05)。添加GSPE对肉鸡组织中Hg含量无显著影响(P>0.05)。在第3周和第6周,胸肌、肝脏、肾脏和羽毛中Hg的含量随着与日粮中Hg含量的添加呈现较强的线性相关关系。在相同剂量的处理组中,各组织中Hg残留量由高到低的顺序为羽毛>肾脏>肝脏>胸肌。当日粮中Hg含量高于10mg/kg时,胸肌中Hg含量超过食品卫生标准中肉及肉类总Hg的限量值(≤0.05mg/kg,GB 2762-2017)。3、日粮中Hg对肉鸡肝脏的损伤及添加GSPE的缓解效果日粮中Hg对肉鸡肝脏造成了损伤。肝脏病理学显示,在第3周和第6周各剂量的Hg均对肉鸡肝脏结构造成损伤,表现为肝细胞可见脂肪变性,胞浆中可见圆形空泡,汇管区可见炎症细胞浸润,炎症灶中可见少量细胞坏死。血清生化指标显示,在第3周,10 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg Hg显著增加肉鸡血清ALT活性(P<0.05),50 mg/kg Hg显著增加血清中AST和ALP的活性(P<0.05),血清中TP和ALB的含量随着日粮Hg水平的提高而显著降低(P<0.05);在第6周,25 mg/kg和50 mg/kg Hg显著升高血清ALT和AST的活性(P<0.05),50 mg/kg Hg显著降低血清中TP的含量(P<0.05)。肝脏抗氧化指标显示,在第3周,10 mg/kg和25 mg/kg Hg显著降低了(P<0.05)肝脏CAT的活性,50mg/kg Hg显著降低了(P<0.05)肝脏SOD、CAT和GPX的活性和显著升高了(P<0.05)肝脏MDA的水平;在第6周,5 mg/kg Hg显著降低了(P<0.05)肝脏GPX的活性,10 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg Hg显著降低了(P<0.05)肝脏SOD和GPX和显著升高了(P<0.05)肝脏MDA的含量。此外,50 mg/kg Hg显著抑制了(P<0.05)肝脏中Nrf2、NQO1和gpx1的m RNA的表达,促进了Keap1的m RNA表达(P<0.05)。日粮中添加450 mg/kg GSPE,缓解了Hg诱导的肝脏病理学改变,显著降低血清中AST、ALT的活性(P<0.05),显著提高了肝脏SOD活性并降低MDA水平(P<0.05)。同时,相较于50 mg/kg Hg,GSPE促进了肝脏Nrf2和gpx1的m RNA表达,抑制了Keap1的m RNA表达(P<0.05)。4、日粮中Hg对肉鸡肾脏的损伤及添加GSPE的缓解效果日粮中Hg对肉鸡肾脏造成损伤。肾脏病理学显示,在第3周和第6周各剂量Hg均对肉鸡肾脏造成损伤,肾小管发生退行性变,肾小管结构不清,伴有炎性细胞浸润,并可见纤维化,少量细胞发生坏死。血清生化指标显示,在第3周,50 mg/kg Hg显著升高(P<0.05)血清BUN、CREA和TG含量,降低血清中CHOL的含量(P<0.05);在第6周,25 mg/kg Hg显著增加(P<0.05)血清CREA含量。50 mg/kg Hg使血清中BUN、CREA和TG含量显著增加(P<0.05)。肾脏抗氧化指标显示,在第3周,5 mg/kg、10 mg/kg和25 mg/kg Hg显著降低了(P<0.05)肾脏GPX活性,50 mg/kg Hg显著降低(P<0.05)肾脏CAT和GPX的活性和增加(P<0.05)肾脏MDA的水平;在第6周,5 mg/kg、10 mg/kg Hg显著降低(P<0.05)肾脏CAT的活性。25 mg/kg、50 mg/kg Hg显著降低(P<0.05)肾脏CAT和GPX的活性,50 mg/kg Hg显著增加(P<0.05)肾脏MDA的含量。此外,50 mg/kg Hg显著抑制了(P<0.05)肾脏Nrf2和gpx1m RNA的表达,诱导了(P<0.05)Keap1的m RNA表达。日粮中添加450 mg/kg GSPE,缓解了Hg诱导的肾脏病理学变化,显著降低了血清BUN、CREA的活性(P<0.05),显著升高了肾脏CAT和GPX的活性(P<0.05),显著降低了肾脏MDA的水平(P<0.05)。同时,相较于Hg组,GSPE促进了肾脏Nrf2、HO-1和gpx1的基因的表达和抑制Keap1基因的表达(P<0.05)。综上所述,本研究得出结论如下:(1)日粮中50 mg/kg Hg显著降低肉鸡第3周生长性能。(2)胸肌、肝脏、肾脏和羽毛中Hg的含量与日粮中Hg含量的添加呈现较强的线性相关,Hg在肉鸡体内的分布规律为羽毛>肾脏>肝脏>肌肉,当日粮中Hg含量高于10 mg/kg时,胸肌中Hg含量超过食品卫生标准中肉及肉类总Hg的限量值。(3)日粮中Hg浓度达到10 mg/kg Hg可造成肉鸡肝脏损伤和氧化应激,日粮中Hg浓度达到25 mg/kg Hg可造成肉鸡肾脏损伤和氧化应激。(4)原花青素可缓解Hg诱导的生长性能的降低,可能通过激活Nrf2信号通路,提高肝、肾抗氧化能力,缓解Hg引起的损伤。
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