麦冬总皂苷的分离纯化及活性研究

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本文以麦冬为原料,用95%乙醇热回流法提取麦冬总皂苷和总黄酮,以70%乙醇为洗脱液通过大孔吸附树脂柱分离得到总皂苷,利用硅胶柱色谱分离得到麦冬皂苷D;采用酸碱沉淀法分离得到总黄酮;采用冷乙醇分离法提取分离得到总蛋白质。   以蛋白质在紫外280 nm的吸光度为评价蛋白提取量的指标,优化从麦冬中提取总蛋白质的最佳条件,分别考察了不同提取料液比、不同提取溶剂、不同提取时间和不同提取液浓度,试验结果显示:4℃时,以1:20(g:mL)的料液比,用pH为9.00的磷酸盐缓冲溶液提取时间为6 h所得的麦冬总蛋白提取量最多。   以液相色谱-质谱联用法(liquid chromatography-mass spetrometry,LC-MS),建立了LC-MS法测定麦冬皂苷D含量的方法,对方法学进行了考察。试验结果表明:采用:MonoChrom(2.0 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相由甲醇-纯水(80:20)组成,流速0.3 mL/min,柱温30℃,质谱采用ESI电离源、负离子检测模式。麦冬皂苷D线性回归方程为Y=37415X4-128.32,r=0.9999;麦冬皂苷D在0.05~1.60μg/mL线性关系良好;高中低三个不同浓度的日内RSD分别为1.84%、1.18%、1.79%,日间RSD分别为1.30%、1.45%、1.80%;高中低三个不同浓度的平均加样回收率分别为111.98%、103.02%、100.96%,RSD为2.16%、2.85%、3.75%;川麦冬、浙麦冬中麦冬皂苷D在总皂苷中的含量相差很大,浙麦冬中麦冬皂苷D含量很低。该方法简单快捷,灵敏度高,重复性好,适于分析测定川麦冬提取物中麦冬皂苷D的含量以及麦冬药材的质量控制。   以典型抗氧化剂抗坏血酸、硫脲、几茶素为阳性对照,以IC50值作为评价样品清除DPPH自由基能力的指标,采用DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)法,测定麦冬总皂苷、总黄酮和总蛋白质清除DPPH自由基的能力。试验结果表明:在波长517 nm测定,DPPH的浓度在65.0~130.0μmol/L具有良好的线性关系,建立的DPPH自由基清除测定方法可靠、便捷;典型抗氧化剂抗坏血酸、硫脲、儿茶素的IC50值分别为87.05、482.90、10.15μg/mL,麦冬各提取物总皂苷、总黄酮、总蛋白质的IC50值分别为509.0、79.4、46.0μg/mL,各种物质的抗氧化性强弱顺序为:儿茶素>麦冬总蛋白质>麦冬总黄酮>抗坏血酸>硫脲>麦冬总皂苷。最终得出麦冬总黄酮和总蛋白质具有较强的抗氧化能力。
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