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目的探讨实时剪切波弹性成像(shear wave elastrography,SWE)与超声造影成像技术(contrast-enhanced ultrasound,CEUS)对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)不同进展阶段的诊断价值,并初步分析其机制。方法(1)将39只健康新西兰大白兔随机分为普通饲料组(A1组、A2组、A3组),每组3只;高脂饲料组(B组、C组、D组),每组10只。A1组、A2组、A3组普通饲料分别饲养4周、8周、12周;B组、C组、D组高脂饲料分别饲养4周、8周、12周。(2)普通饲料组和高脂饲料组兔饲养前行肝脏常规二维超声和SWE检查,获得肝脏Emean值。(3)各组兔于饲养期结束后行肝脏常规二维超声、SWE和超声造影检查,分析Emean值和相关造影参数(PI、TP、MTT及AUC)的变化。超声检查结束后各组兔取下腔静脉血约5ml,实验室检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyeride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)值。同时,取兔肝组织行HE染色、油红O脂肪染色、Masson纤维染色、TUNEL检测及电镜切片,对比观察正常对照组、非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)组、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)组及纤维化组的组织病理学及超微结构改变。结果1.随着饲养时间4W、8W、12W的延长,普通饲料组和高脂饲料组兔的体重均值、肝重均值、肝指数均值均增加,其中高脂饲料组明显高于普通饲料组(B>A1、C>A2、D>A3),差异均有统计学意义(P<0.01)。2.NAFLD不同病理分期实验兔肝脏弹性成像Emean值,表现为正常对照组<NAFL组<NASH组<纤维化组,即随着NAFLD疾病谱的进展,Emean值呈递增趋势,两者呈高度正相关,Spearman相关系数为0.948(P=0.000<0.01),且各组间Emean值的差异具有统计学意义(P=0.000<0.01)。3.NAFLD不同病理分期实验兔肝脏超声造影表现,NAFL组、NASH组及纤维化组峰值强度(peak Intensity,PI)、曲线下面积(AUC)均明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而NAFL组与NASH组间的PI、平均渡越时间(mean transmit time,MTT)差异亦有统计学意义(P<0.05)。4.弹性成像Emean值与超声造影联合参数(PI+TP+MTT+AUC)对NAFLD不同病理分期的诊断效能均较高,二者ROC曲线下面积相近。5.NAFLD不同病理分期实验兔肝功能检查显示纤维化组、NASH组ALT明显增高,与其他各组差异均有统计学意义(P<0.01);AST随NAFL组、NASH组、纤维化组的病程进展呈增高趋势,仅纤维化组较其他各组的差异有统计学意义(P<0.01)。6.NAFLD不同病理分期实验兔血脂变化呈现NAFL组、NASH组及纤维化组TC、TG、LDL-C均高于正常对照组,但仅NASH组及纤维化组TC、LDL-C与正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)。7.NAFLD不同病理分期实验兔肝组织HE染色,正常对照组镜下见正常肝组织,肝小叶内无或偶见肝细胞脂肪贮积;NAFL组低倍镜下见肝小叶内>33%肝细胞脂肪变性,但无炎症、气球样变、坏死和纤维化等组织学改变;NASH组见肝细胞内有大量脂肪滴贮积,伴肝细胞气球样变或坏死、炎症细胞浸润,可有轻度窦周纤维组织增生(S1期);纤维化组见窦周及门脉周围较广泛纤维化,并见桥接纤维化(S2、S3期)。8.NAFLD不同病理分期实验兔肝组织油红O脂肪染色,NAFL组、NASH组、纤维化组肝细胞肿大,胞浆内均可见大量红色脂滴。9.NAFLD不同病理分期实验兔肝组织Masson纤维染色,NASH组部分肝组织内窦周可见少量蓝色胶原纤维;纤维化组可见较广泛的窦周及汇管区纤维组织增生,部分见桥接纤维化。10.NAFLD不同病理分期实验兔肝组织TUNEL法检测,NAFL组、NASH组、纤维化组均可见棕色的凋亡细胞。11.NAFLD不同病理分期实验兔肝组织超微结构改变,NAFL组肝细胞内出现大量脂滴,线粒体、粗面内质网肿胀;NASH组肝细胞内充满大小不一的脂肪滴,细胞核和细胞器结构改变更明显,并见凋亡细胞及嗜酸粒细胞;纤维化组结构更为紊乱,并见胶原纤维形成。结论1.随着NAFLD疾病谱的进展,弹性成像Emean值呈递增趋势,两者呈高度正相关,且各组间Emean值差异均具有统计学意义(P=0.000<0.01),提示SWE可用于实验兔脂肪肝NAFL、NASH及进展期肝纤维化的分期诊断,且诊断效能高,为临床应用研究提供实验依据,Emean值有望成为临床诊断脂肪肝的定量参数。2.本研究结果显示,Emean值的增高可能与肝细胞脂肪变性致细胞肿胀,组织内张力增高、炎症反应及纤维化等组织学改变有关。3.超声造影参数PI、AUC对NAFLD与正常对照组的鉴别有诊断价值,而PI、MTT可能对NAFL与NASH的鉴别诊断有一定帮助;其联合参数(PI+TP+MTT+AUC)对不同NAFLD进展阶段也有较高的诊断效能。4.肝功能指标ALT对于NASH、纤维化组的诊断有一定的参考意义,而AST仅对纤维化组的诊断有一定的参考意义。血脂指标TC、TG、LDL-C对NAFL、NASH、NASH相关肝纤维化间的鉴别诊断价值不大。5.本实验研究通过肝功能、病理组织学及超微结构等多模态检测,证实采用高脂饲料喂养新西兰大白兔造模,可在较短时间内进行从NAFL、NASH至NASH相关肝纤维化系列病变模型的复制。