儿童急性下呼吸道感染(acute lower respiratory infection, ALRI)是儿科的常见疾病,其发病率在儿科各类别的疾病中位居前列。此种疾病可由细菌、病毒、支原体、衣原体等多种病原微生物感染引起。其中病毒感染是儿童急性下呼吸道感染最主要原因之一。呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是目前世界范围内婴幼儿,特别是2岁以下儿童,急性下呼吸道感染最主要的病毒病原体,常导致肺炎和毛细支气管炎,并可导致支气管哮喘急性发作,亦有报道其致早产儿、支气管-肺发育不良及免疫功能不全者死亡,是婴幼儿呼吸道感染致死最常见的病毒。儿童RSV的感染非常普遍,90%以上的儿童2岁以前感染过RSV,约50%曾经有过两次或以上的感染。健康儿童第1次感染RSV后约有1/3为下呼吸道疾病,0.5%-2%者因症状严重需住院治疗。Morris等1956年从实验室流行的类似“感冒”的黑猩猩鼻洗液标本中分离出一种病毒,当时称为“黑猩猩感冒因子”。不久后,Chanock等从患呼吸道感染(肺炎和哮喘)的婴幼儿呼吸道标本中分离到同样的病毒,因为这种病毒可使培养的细胞产生独特的细胞融合现象,故命名为呼吸道合胞病毒。此后世界各地的研究均证明RSV是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染最重要的病毒病原体,无论是在发达国家还是发展中国家,凡是能进行病原学研究的地方,都发现RSV是婴幼儿,尤其是小婴儿,下呼吸道感染最重要的病原体。而且与其他的呼吸道病毒病原体不同,RSV表现为特殊的感染和发病的形式,尤其在小婴儿组该病毒引起的严重的甚至危及生命的下呼吸道感染的致病机制始终是困扰流行病学家和病毒学家的迷。RSV是一种负股、单链、有包膜的RNA病毒,为副黏病毒科肺病毒属成员。RSV根据其抗原性的不同可分为A、B两个亚型,不同亚型中还可再分为亚型株。RSV的两个抗原亚型最初是在对其中的亚型代表株A2株和CH18537株抗体中和实验中发现和证实的,在全球范围内对分子流行病学的研究发现,RSV的两个亚型之间的序列差异,提示它们各代表了两个不同的进化谱系,而不仅仅是少数主要的抗原位点变异。RSV的基因组RNA长约15200个核苷酸,含有10个基因,依次为NS1、NS2、N、P、M、SH、G、F、M2、L,共表达11种蛋白,其中M2基因编码有两个蛋白质M2-1和M2-2。而G蛋白则是RSV最易发生抗原变异的胞膜糖蛋白,和病毒与细胞的粘附有关,亚型间和亚型内的变异均极大,是RSV逃逸免疫攻击的重要手段。不同亚型的RSV的G蛋白氨基酸的同源性可仅有53%,抗原相关性仅5%。不同亚型的G蛋白不能提供有效的交叉保护作用,亚型的存在有可能与RSV的反复感染有关。据报道,在美国20%-53%的婴儿会在生后第一年内发生1次下呼吸道感染。在我国,据保守估计,如今我国每年出生的新生儿数量已高于2000万,每年至少会发生1000万例次的儿童下呼吸道感染。因此我国儿童下呼吸道感染的发病数量之众难以想象。据记录,历史上我国也曾经有过儿童RSV感染病例大规模流行的记录,1971、1975年在江西、浙江、福建、上海、广西及广东等6省、市、自治区发生的主要由RSV引起的流行性喘憋性肺炎大流行,总发病数在10万例次以上。虽然后来类似这样的全国性大面积病毒性感染病例大流行并不多,但RSV致下呼吸道感染在全国各地均较多见,一直是危害我国婴幼儿身体健康和生命安全的主要疾病。RSV感染的下呼吸道感染,多以喘息为主要临床表现,严重者可合并急性呼吸衰竭、心力衰竭以及脑水肿,甚至出现呼吸暂停、窒息等引起死亡。RSV通过密切接触或吸入来自RSV感染的病患打喷嚏或咳嗽出的大量微粒传播,也有通过接触其污染物(如被污染物的表面或物体)传播的。目前RSV感染已成为世界性严重的公共卫生问题,感染发病呈全球性,亦有局部暴发流行,呼吸道合胞病毒的流行具有季节性及地域性。根据抗原性的不同,呼吸道合胞病毒分为A、B两个亚型,设计不同的引物,采用RT-PCR检测区分这两个亚型,然而呼吸道合胞病毒在一个地区的流行一般以一个亚型为主。RSV的传播途径广泛且具有明显的季节流行性。随着经济的发展、医疗水平的提高及儿童营养状况得到改善等,肺炎在我国儿童致死原因中逐年下降,但下呼吸道感染对儿童生命健康仍然构成重大的威胁。呼吸道合胞病毒是下呼吸道感染的主要病原体,仅次于肺炎链球菌和流感嗜血杆菌。为了解东莞市下呼吸道感染住院儿童RSV的流行病学特征,为临床的预防和治疗提供依据,本研究采用RT-PCR检测2013年1月～2014年12月东莞市人民医院下呼吸道感染住院儿童鼻咽部提取物中呼吸道合胞病毒的感染状况,并统计分析呼吸道合胞病毒的感染与年龄、性别及感染年份和月份之间的关系。[对象和方法]1.对象：收集2013年1月-2014年12月东莞市人民医院下呼吸道感染住院儿童患儿的鼻咽提取物标本为研究对象,共920例。年龄2月-11岁,平均(2.9±4.8)岁,其中男性儿童560例,女性儿童360例,所有纳入研究对象的住院儿童的诊断均符合第8版《褚福堂实用儿科学》相应的下呼吸道感染的诊断标准：年龄在14岁以下,具有咳嗽、咳痰、气促、听诊肺部呼吸音异常、体温大于38℃中的一项或几项,并伴具有典型的下呼吸道感染症状,无肺组织功能性疾病和合并其它系统的感染,诊断为支气管炎、毛细支气管炎、肺炎等下呼吸道感染。排除合并其他影响心肺功能的疾病,如先天性心脏病、闭塞性细支气管炎、肺大泡、支气管扩张、支气管肺发育不良等及免疫缺陷性疾病。2.方法：每例纳入研究对象的患儿均采集鼻咽拭子标本1根,置于4℃冰箱保存,48 h内对鼻咽分泌物标本提取RNA和逆转录合成,操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。RNA提取和逆转录合成试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。然后用使用中山大学达安基因股份有限公司提供的呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)扩增。RT-PCR扩增方法：反应条件设置为：50℃ 15min,1个循环：95℃15分钟,1个循环;94℃15秒→55℃45秒(收集荧光),40个循环。呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)由中山大学达安基因股份有限公司提供,PCR引物由上海生工生物技术有限公司提供。所有操作均由同一个有中级职称的检验科工作人员严格按照试剂说明书操作。3.数据分析：采用SPSS19.0进行统计,以百分数(%)表示计数资料,应用χ2检验,以P<0.05为有无统计学意义的检验标准。[结果]符合条件纳入研究对象的儿童共920例,年龄2月～11岁,平均(2.9±4.8)岁,其中男性儿童560例,女性儿童360例,检测呼吸道合胞病毒阳性194例,男性儿童为134例,女性儿童为60例,其中重症肺炎32例,占16.49%,其中男25例,女7例,均为2岁以下儿童。RSV导致的重症肺炎儿童中,不同亚型的比率差别无统计学意义。在RSV阳性的194例儿童中PCT< 0.05ng/mL者163例,PCT0.05-0.2ng/mL者31例,没有1例RSV感染者PCT>0.2ng/mL;194例儿童的痰培养及血培养均阴性。1.阳性检出率与住院儿童性别分析：东莞市人民医院下呼吸道感染住院儿童RSV检出阳性为194例,RSV总阳性率为21.09%,其中A型为149例,占76.80%,B型为45例,占23.20%。男性儿童为134例,阳性率为23.93%；女性儿童为60例,阳性率为16.67%。男性儿童RSV阳性检出率与女性儿童阳性检出率的差异有统计学意义(χ2=4.812,P<0.05)。2.阳性检出率与住院儿童年龄及临床症状的关系：2岁以下儿童520例,阳性率为27.69%,2岁以上儿童400例,阳性率为12.50%。2岁以下RSV感染的儿童中144例儿童均有咳嗽症状：有发热症状者有108例,占75.0%;有喘息症状者有112例,占75.68%。2-11岁RSV感染的儿童中50例儿童均有咳嗽症状：有发热症状者24例,占48.0%；有喘息症状者12例,占24.0%。2岁以下儿童检出RSV的阳性率显著大于2岁以上儿童的阳性率,差异有统计学意义(χ2=4.812,P<0.05)。3.阳性检出率与住院儿童年份的关系：东莞市人民医院2013年下呼吸道感染住院儿童为440例,RSV阳性检出率为94例,占21.36%；2014年下呼吸道感染住院儿童为480例,RSV阳性检出率为100例,占20.83%。2年间RSV阳性率差别无统计学意义(χ2=0.019,P>0.05)。4.阳性检出率与住院儿童月份的关系：东莞市人民医院下呼吸道感染住院儿童10～12月份和1～3月份的RSV阳性检出率比较差异无统计学意义(χ2=0.082,P>0.05)；4～6月份和7～9月份的RSV阳性检出率比较差异无统计学意义(χ2=0.107,P>0.05)。但1～3和10～12月份与4～9月份RSV阳性检出率比较,差异有统计学意义(χ2=14.938,P<0.05)。[结论]1.在东莞市人民医院,2013-2014年下呼吸道感染住院儿童的RSV感染以A型为主,男性多于女性。2.RSV导致的重症肺炎儿童均为2岁以下,不同亚型RSV感染致重症肺炎的比率差别无统计学意义。3.在下呼吸道感染儿童中,2岁以下儿童RSV的感染率大于2岁以上儿童。4.在东莞地区,2013年与2014年儿童的RSV感染情况大致相同。5.冬春季节(10～12月份及1～3月份)儿童RSV的感染率大于夏秋季节(4-6月份和7-9月份),应指导家长做好防范工作。6.2岁以下儿童感染RSV以发热、喘息症状为主；2岁以上儿童感染RSV以咳嗽症状为主。