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家蚕丝腺具有高效合成分泌蛋白的能力,并且丝腺内蛋白能够随着吐丝行为进入茧层,是一种理想的生物反应器。 人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)占血浆蛋白50%以上,是维持血液渗透压的重要组成部分,而且还具有运输功能,是重要的生物学制剂。本研究将piggyBac转座酶或TALE-piggyBac融合转座酶分别与人血清白蛋白表达质粒pBHSA共同注射到蚕卵内,经荧光筛选和目的基因PCR扩增鉴定证实,成功获得了77个稳定遗传和表达分泌人血清白蛋白转基因家蚕家系。通过荧光定量PCR检测,筛选到HSA mRNA表达量较高的转基因家蚕家系A2。用磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer saline,PBS)提取茧层可溶性蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western blot证实转基因家蚕茧层中含有人血清白蛋白。灰度分析显示,转基因家蚕家系A2的茧层中人血清白蛋白占总可溶蛋白的29.1%,占茧层重的1.74%。 蜂王浆主蛋白1(Major royal jolly protein1,MRJP1)具有抗肿瘤和降血压等多种生物学功能,还是决定蜜蜂级型分化的关键因子。本研究将TALE-piggyBac融合转座酶与中华蜜蜂蜂王浆主蛋白1表达质粒pBMRJP1共同注射到蚕卵内,经荧光筛选和目的基因PCR扩增鉴定证实,成功获得3个稳定遗传和表达分泌中蜂MRJP1转基因家蚕家系。通过荧光定量PCR检测,筛选到MRJP1 mRNA表达量较高的转基因家蚕家系Q4。用PBS提取茧层蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western blot证实转基因家蚕茧层中含有MRJP1蛋白。灰度分析显示,转基因家蚕Q4的茧层中MRJP1蛋白占总可溶蛋白的10.8%,占茧层重的0.78%。 本研究成功开发了人血清白蛋白和蜂王浆主蛋白1转基因家蚕生物反应器,发现后部丝腺合成分泌的水溶性外源蛋白可以随着家蚕吐丝进入茧层中,可以直接用PBS提取,拓展了家蚕生物反应器的开发和应用的途径。